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目的:克隆口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth disease Virus,FMDV)整联蛋白受体β1亚基基因,构建其全基因组的真核表达载体。利用大肠杆菌诱导表达其配体结合区﹝Ligand-Binding Domain,LBD﹞,纯化表达产物免疫家兔制备多克隆抗体,进行免疫原性和免疫反应性分析,为探索口蹄疫病毒对αvβ1的利用率及β1亚基的功能奠定基础。方法:1.参照Genbank公布的整联蛋白β1亚基的基因组序列,设计并合成两对特异性引物,以RT-PCR方法从牛肺组织扩增出目的基因,回收纯化连入PGEM-T载体,测序鉴定。依照测序结果设计真核表达引物,以克隆载体PGEMβ1为模板扩增所需表达片段,酶切纯化后定向亚克隆至真核表达载体pCDNA3.1zero(+)中,构建表达载体pCDNAβ1。2.通过生物信息学分析,筛选β1基因的优势抗原表位,选取胞外的配体结合区与6×His融合,在大肠杆菌中大规模诱导表达,利用SDS-PAGE对表达产物进行鉴定。用Ni2+亲和柱层析纯化重组蛋白,纯化后的蛋白免疫新西兰家兔制备多克隆抗体,间接ELISA法检测免疫兔血清中重组LBD多克隆抗体的效价,对LBD的免疫原性进行分析。盐析法纯化多克隆抗体,并利用western-blot检测多克隆抗体的特异性。结果:1.0%的琼脂糖凝胶电泳显示RT–PCR产物呈弥散状态,用另一对引物进行巢式扩增,得到2400bp的目的片段;测序分析β1基因全长2394bp,编码798个aa,包括20个aa的信号肽序列,708个aa的胞外区,29个aa的跨膜区和41个aa的胞质区,哺乳动物间氨基酸同源性达94%以上;PCR、酶切、序列测定鉴定表明成功构建了真核表达载体pCDNAβ1;Expasy软件分析β1基因的抗原性及结合国外的相关资料选取346—843bp位作为配体结合区,与6×His融合;SDS-PAGE分析显示,表达、纯化后获得一相对分子量(从)约为26 KDa的目的蛋白条带,目的蛋白在菌体细胞内主要以包涵体形式存在;经Ni-NTA亲和纯化获得了较高纯度的重组蛋白;利用纯化的重组LBD蛋白免疫新西兰兔,间接ELISA法测定兔免疫血清特异性抗体效价在1:12800以上;Western-blot检测表明LBD蛋白能与LBD抗血清发生特异性反应。结论:克隆了口蹄疫病毒整联蛋白受体β1基因的全基因组,并成功构建了其真核表达载体。在大肠杆菌中成功表达了β1基因配体结合区,获得分子量为26KD的重组蛋白。LBD具有较好的免疫原性,能刺激新西兰家兔产生高效价的抗体,并具有较强的反应特异性。