农杆菌倡导PSAG12-IPT基因转化茄子的研究

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:h120568
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
茄子(Solanum melongena L.)是茄科重要蔬菜之一,其风味别致、营养价值高,深受消费者欢迎。但是,在茄子的栽培过程中常常会受到衰老和各种逆境的影响,给生产造成很大损失。近几年随着生物技术的发展,已经可以采用转基因技术对茄子的性状进行改良。  异戊烯基转移酶(Isopentenyl-Transferase,IPT),也称细胞分裂素合成酶,是植物细胞分裂素合成的限速酶。IPT在转基因植株中表达后,会使植株细胞分裂素含量增加,衰老延缓,抗性提高,但过高对植物的生长和育性都是有害的。如果将衰老特异性启动子PSAG12与IPT融合,在PSAG12的启动下,IPT只有在叶片衰老时才表达合成细胞分裂素,既能延缓衰老又不影响植物的生长发育。本研究的目的是探讨PSAG12-IPT导入茄子对衰老和抗性的影响,同时选用磷酸甘露糖异构酶基因PMI作选择基因,取代具有生态风险的抗性基因,为茄子高产育种提供理论基础。主要取得了以下研究成果:  1、建立再生体系  通过对2%有效氯的NaClO溶液浸泡时间对三月茄发芽的影响的探讨,最终确定三月茄种子用75%酒精消毒45S,2%有效氯的NaClO溶液浸泡15min后,播种于1/2MS培养基上获得无菌苗。将14d~16d的三月茄无菌苗在超净工作台上切成三种类型的外植体一子叶、茎尖、下胚轴,下胚轴切成1cm左右长的小段。子叶、茎尖接种在分化培养基上,下胚轴横向平放、正向扦插、反向扦插在分化培养基上,进行再生体系的研究。结果表明,转化三月茄适宜用茎尖、下胚轴正向扦插。  2、优化茄子遗传转化体系  对农杆菌的浸染和转化过程进行了研究,用分化培养基(MS+0.1mg/LIAA+2mg/LZT+3%蔗糖+0.8%琼脂)进行2天预培养,用OD600≈0.8的农杆菌工程菌液浸染10min左右,然后用分化培养基(MS+0.1mg/LIAA+2mg/LZT+3%蔗糖+0.8%琼脂)进行2天共培养,然后在抑菌筛选分化培养基(MS+0.1mg/LIAA+2mg/LZT+400mg/LCef+2%蔗糖+2%甘露糖+0.8%琼脂)中进行40天培养,在生根培养基(1/2MS+400mg/LCef+2%蔗糖+2%甘露糖+0.8%琼脂)中进行20天培养,获得抗性小苗,待根粗壮后炼苗、移栽。  3、抗性植株的分子生物学检测  改良CTAB法提取抗性植株的基因组DNA,根据PMI序列设计引物进行PCR扩增检测。然后根据PMI设计引物,对PCR检测为阳性的植株进行Southern杂交检测,最终得到4棵转基因植株,表明目的基因已经整合到受体植株基因组中,3株以双拷贝形式存在,1株以单拷贝形式存在。RT-PCR检测表明,目的基因在生长旺盛期,只在转基因植株的下部叶片中表达;而进入衰老期后,目的基因在中部叶片和下部叶片中均表达。  4、转基因植株的生物学性状鉴定  对检测为转基因植株进行了生物学性状的调查,结果表明,转基因植株的开花期早于对照,转基因植株高度及开展度均大于对照,结果数及单株产量均高于对照植株。  5、转基因植株进行了生理生化指标鉴定  对获得的转基因植株进行生理生化指标测定,结果表明,转基因植株的叶绿素含量、类胡萝卜素含量、SOD酶活性和POD酶活性均高于对照,而MDA含量低于对照。  6、对转基因植株进行了抗逆性鉴定  对转基因植株的抗逆性鉴定表明,转基因植株在耐衰老性,耐旱性、耐寒性等方面较对照有一定程度的提高。
其他文献
关注项目三年多方考察终加盟比上期报道的东莞的老许更谨慎,云南的赵为关注英才教育3年多。从央视上看到英才教育报道开始,到后来在多家杂志上看到英才的事迹,赵为这才动心。
By combining first-principles calculations with the particle swarm optimization algorithm, we predicted a hexagonal P ˉ3m1 structure for TcB, which is energeti
结球甘蓝(Brassica oleracea L. var. capitata L.)简称甘蓝,为十花科蔬菜。在我国各地均有栽培,是我国主要蔬菜作物之一,在我国蔬菜的全年供应中占有重要地位。甘蓝根肿病是由芸薹根肿菌(Plasmodiophora brassicae Woron.)侵染引起的一种世界性的土传病害,主要危害十字花科作物。近年来,我国甘蓝根肿病发病面积急剧增加,造成产量和品质大幅度降低,
以自然光环境为对照,研究了弱光环境(分别遮阳65﹪和85﹪)对京玉葡萄(Vitis vinifera L.cv.Jingyu)幼苗生长和光合特性的影响及其生理机制.京玉葡萄幼苗能够在形态、结构及生理生化特
机关枪是一种公认的威力极大的枪械,它的体型往往十分庞大,可以在很远距离对敌人造成大规模的杀伤。从最初的摇动曲柄装弹,到后来的只要按下一个按钮就可以让子弹倾巢而出,机关枪在战争的洗礼中,不断地完善自己,成为令敌人胆寒的“地狱使者”。想知道世界上第一支机关枪是谁发明的吗?想知道服役时间最长的机枪是哪一种吗?想知道《铁血战士》中那把威力无比的转轮机枪叫什么名字吗?好吧,不卖关子了,一起来看一下吧!   
平邑甜茶(Malus hupehensis var.pinyitiancha)是一种重要的苹果砧木,具有许多优良特性,如抗涝,抗寒,抗盐等,特别是具有无融合生殖能力,但抗旱能力较差.该实验以农杆菌介导法
魔芋属(Amorphophallus Blame)植物起源于亚洲中南半岛偏北部和云南南部,其始祖种为热带森林下层草本植物,生长环境为半阴半阳,在魔芋生产中常采用适当遮光栽培。魔芋适当遮
品种资源数据库(性状信息库)在服务于种质资源的研究和利用中显得极为重要。它利用电子技术发挥记忆、贮存、运算、判断和处理等多种功能,实现高效、快速和准确的现代化管理