褪黑素对人胃癌细胞SGC-7901的抑制作用及其对survivin、livin表达的影响

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目的观察褪黑素对人胃癌细胞SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响,并通过研究其对凋亡抑制蛋白survivin和livin的调控,探讨褪黑素促进胃癌细胞凋亡的一些可能的机制。方法①建立人胃癌细胞SGC-7901细胞褪黑素干预模型:人胃癌细胞SGC-7901传代培养,按褪黑素干预浓度不同分为5个组,1mM组、2mM组、3mM、4mM组、5mM组,并设立空白对照组。褪黑素干预24h。②CCK-8法观察褪黑素干预对培养胃癌细胞生长的影响。③应用流式细胞术检测褪黑素干预后各组细胞的凋亡率。④应用TUNEL法检测褪黑素干预后各组细胞的凋亡率。⑤应用免疫组织化学染色和图像分析软件分析比较各组细胞survivin和livin的表达情况。⑥应用蛋白免疫印迹(western bolt)技术和图像分析软件分析各组细胞survivin和livin蛋白表达量的变化。⑦应用实时荧光定量PCR比较分析各组细胞survivin和livin的mRNA表达变化。结果①CCK-8结果显示褪黑素干预下各组胃癌细胞生长受到抑制,呈剂量依赖性。②流式细胞术结果显示随着褪黑素浓度增高,肿瘤细胞的凋亡率增加;与对照组相比,3、4、5mM组结果有统计学意义。③TUNEL结果显示随着褪黑素浓度增高,肿瘤细胞凋亡率增加,与对照组相比,结果有统计学意义,与流式细胞术结果基本一致。④免疫组化结果显示,各褪黑素干预组survivin阳性肿瘤细胞平均光密度值减少,与对照组相比,除1mM外,各组均有显著性差异;褪黑素各干预组livin阳性肿瘤细胞平均光密度值减少,与对照组相比,除1mM外,各组均有显著差异。⑤Western bolt结果显示,各褪黑素干预组肿瘤细胞survivin蛋白表达减少,与对照组相比,除1mM组外,各组均有显著性差异;各褪黑素干预组livin蛋白表达减少,与对照组相比,各组均有显著性差异。⑥实时荧光定量PCR结果显示,各褪黑素干预组肿瘤细胞survivin mRNA表达减少,与对照组相比,除1mM外,各组均有显著性差异;各褪黑素干预组livin mRNA表达减少,与对照组相比,各组均有显著性差异。结论人胃癌细胞SGC-7901经褪黑素干预24h后,肿瘤细胞生长受到抑制,出现凋亡,呈剂量依赖性;同时,凋亡抑制蛋白survivin、livin基因的转录、翻译、表达水平都有不同程度的下降,大体呈剂量依赖性。表明褪黑素具有下调survivin、livin表达的作用。褪黑素下调survivin、livin的表达,可能是其抗肿瘤的机制之一。
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