乙型肝炎病毒表面抗原调节HepG2细胞中miR-31的表达

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目的:研究完整的HBV及HBV的重要组成部分HBsAg对肝癌细胞HepG2中miR-31表达的调节作用。方法:构建哺乳动物HBsAg过表达载体,并将其和空载体分别稳定转染HepG2细胞,通过最佳G418筛选浓度筛选稳定过表达HBsAg的肝癌细胞系,用酶联免疫吸附测定法及细胞免疫组化法鉴定稳定过表达HBsAg的肝癌细胞株,并通过测序鉴定miRNAs在该细胞株中的表达情况。选择测序变化较显著的miRNA,用定量逆转录-聚合酶链反应检测其在普通肝癌细胞株及稳定过表达HBsAg的肝癌细胞株中的表达水平。结果:成功构建了哺乳动物HBsAg表达载体(pTARGET-HBsAg),建立了稳定过表达HBsAg的肝癌细胞系HepG2-H2。测序检测获得变化较显著的常见miRNA,并选取miR-31做定量分析,得出如下结果:miR-31在整合了HBV基因组的HepG2.2.15细胞中的表达量明显低于普通肝癌细胞HepG2,且差异有统计学意义(t=583.8,P<0.001),但在稳定过表达HBsAg的HepG2-H2细胞系中miR-31的表达显著上调,差异有统计学意义(F=24.922,P<0.05)。结论:完整的乙肝病毒能够抑制miR-31的表达,而HBV的重要组成部分HBsAg则在miR-31的表达中起正向调节作用。
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