TGF-β1信号通路调控SYT-SSX1诱导滑膜肉瘤干性特征的初步研究

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目的:  本研究通过体外实验,初步研究SYT-SSX1融合基因对滑膜肉瘤(synovial sarcoma, SS)球体细胞(sphere)的影响,探讨TGF-β1信号通路调控SYT-SSX1对滑膜肉瘤干细胞样细胞的作用,为进一步研究滑膜肉瘤肿瘤干细胞靶向治疗提供一定理论基础。  方法:  用SYT-SSX1 融合基因慢病毒转染滑膜肉瘤SW982细胞,构建SYT-SSX1高表达细胞系,One step RT-PCR检测SYT-SSX1 mRNA表达。无血清悬浮方法培养sphere。运用qRT-PCR、Western-Blot、流式细胞仪检测转染前后CSC标记物mRNA及蛋白表达,Transwell 实验检测转染前后球细胞的迁移能力。TGF-β1重组剂和抑制剂SB431542处理SYT-SSX1 高表达和对照组sphere细胞。运用qRT-PCR、Western-Blot、流式细胞仪检测各组CSC标记物mRNA及蛋白表达,运用正态性检验、t检验等进行统计学分析,P<0.05表示差异有统计学意义。  结果:  ①通过无血清悬浮方法培养后,发现 SYT-SSX1 型高表达细胞比未处理组细胞成球数目多,体积大,成球率高,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.001),表明SYT-SSX1融合基因能促进滑膜肉瘤sphere的形成。qRT-PCR、Western-Blot和流式细胞仪结果表明:SYT-SSX1型高表达sphere细胞干性比未处理组sphere细胞强,且差异有统计学意义(P<0.001)。  ②重组剂TGF-β1处理SYT-SSX1 sphere细胞后, 发现随着rhTGF-β1浓度升高,SYT-SSX1型高表达sphere细胞数目逐渐增加,单个sphere细胞体积逐渐增大。当rhTGF-β1浓度为10ng/ml,增加最明显,且差异有统计学意义(P<0.001)。qRT-PCR、Western-Blot和流式细胞仪结果表明:随着rhTGF-β1浓度升高,SYT-SSX1型高表达sphere细胞干性逐渐增强。当rhTGF-β1浓度为10ng/ml,SYT-SSX1型高表达sphere细胞干性达到最强,且差异有统计学意义(P<0.01, P<0.001)。  ③抑制剂SB431542处理SYT-SSX1 sphere细胞后, 发现随着SB431542浓度升高,SYT-SSX1型高表达sphere细胞数目逐渐减少,单个sphere细胞体积逐渐变小。当SB431542浓度为40 UM时,减少最明显,且差异有统计学意义(P<0.01)。qRT-PCR、Western-Blot和流式细胞仪结果表明:随着SB431542浓度升高,SYT-SSX1型高表达sphere细胞干性逐渐减弱。当SB431542浓度为40 UM时,SYT-SSX1型高表达sphere细胞干性达到最弱,且差异有统计学意义(P<0.01, P<0.001)。  结论:  1.SYT-SSX1融合基因可能促进滑膜肉瘤sphere细胞的增殖,并且可能增强滑膜肉瘤sphere细胞的干性。  2.TGF-β1信号通路可能通过SYT-SSX1融合基因增强滑膜肉瘤干细胞样细胞的干性特征。
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