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2009年3月18日在墨西哥首先出现甲型H1Nl流感,并发现病毒在人与人之间进行传播和蔓延,很快在国际上造成爆发。根据世界卫生组织疫情通报,截止2010年3月7日,甲型H1Nl流感导致全球至少16713人死亡。此次病原体为发生基因重排的、同时含禽、猪、人、流感病毒核酸序列的新型H1N1流感病毒。甲型H1N1基因组为8节段负链RNA,共编码10种与病毒功能和结构相关的蛋白质,其中血凝素(Hemagglutinin,HA)是流感病毒囊膜纤突的主要成分之一,也是流感病毒的主要表面糖蛋白,能诱导机体产生保护性的中和抗体。因此,血凝素HA在流感的预防控制与诊断中有着重要的作用。本研究从NCBI上获得2009年4月来自美国不同州的14个H1N1-HA核酸序列,经核酸序列比对分析,得到共有序列。按照人类密码子使用频率表对共有序列进行优化并全基因合成。把优化后的基因插入到真核表达载体pSNAV中,构建了真核表达质粒pSNAV-Mod.HA与pSNAV-Mod.HA1;质粒转染BHK细胞,经G418筛选后,获得细胞单克隆,用免疫荧光及Western blot技术检测其表达,结果显示两者皆可在BHK细胞中表达,细胞单克隆经免疫荧光技术和Western blot检测十代,显示两者皆可在BHK细胞中稳定表达,最终分别选出一株表达量高的pSNAV-Mod.HA与pSNAV-Mod.HA1细胞系。同时也将优化的HA1基因插入到重组腺病毒的穿梭质粒pDC315中,并和骨架质粒共转染293细胞,包装出携带HA1基因的重组腺病毒Ad-Mod.HA1。通过PCR、免疫荧光和Western Blot检测,结果表明所包装的Ad-Mod.HA是正确的,因此成功包装了腺病毒。本研究获得稳定表达细胞系pSNAV-Mod.HA-BHK与pSNAV-Mod.HA1-BHK及重组腺病毒Ad-Mod.HA1,其表达的HA、HA1蛋白带有6个组氨酸标签,较易纯化。因此,利用稳定表达细胞系与重组腺病毒表达的HA、HAI蛋白在甲型H1N1流感病毒诊断及新型亚单位疫苗研究方面具有发展前景。为进一步制备基因工程疫苗与H1N1流感检测试剂奠定基础。