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禽腺病毒血清4型(Fowl Adenovirus Serotype4,FAdV4)是心包积液综合征(hydropericardium syndrome,HPS)的原发病原,属于腺病毒科、腺病毒属,是一种病毒性传染病,该病于1987年第一次在巴基斯坦的安卡拉地区暴发,因此也被称为“安卡拉”病,世界范围内均有发病。禽腺病毒为双链DNA病毒,无囊膜,直径约70-90nm,呈二十面体对称的球形,病毒对外界环境的抵抗力较强,鸡群中广泛存在隐性感染。2015年下半年,我国多个省份相继暴发了该病,临床主要表现为肝脏肿大,心脏有淡黄色心包积液,蛋鸡和肉鸡均可感染,病死率高达20-80%,给我国养禽业带来严重的危害以及巨大的经济损失。本研究通过鸡肝癌细胞系对临床采集的FAdV-4病料进行分离和鉴定,并稳定传代以及对其致病性进行了详细分析,随后建立了高效的病毒纯化方法,为后续对病毒特性的研究、兽医临床的应用以及单克隆抗体的制备奠定了良好的基础。
本研究运用鸡肝癌细胞系对所采集的病料进行病毒的分离,并详细的对病毒在细胞上的生长特性进行分析,结果显示:病毒可以在鸡肝癌细胞上良好的生长和传代,在接毒后24小时就可以观察到明显的细胞病变;使用qRT-PCR方法进行检测后发现,病毒的毒量在盲传后快速升高,并第7代后逐渐趋于稳定;运用Reed-Muench方法计算病毒的最高滴度为107.8log10TCID50/100μL;运用透射电镜可以清楚的观察到病毒粒子的形态特征。
本研究应用膜包浓缩和Sepharose4Fast Flow(4FF)凝胶层析相结合的方法对病毒进行浓缩、纯化,通过图谱的分析、PCR鉴定以及回归细胞试验等,结果显示:本方法可以高效的对禽4型腺病毒进行纯化,能有效的防止病毒的流失,并且纯化后的病毒可以很好的保持其感染性和免疫原性。
本研究使用分离的病毒株分别对SPF鸡胚和SPF鸡进行感染试验,并对其致病性进行了详细的分析。通过绒毛尿囊膜感染SPF鸡胚后发现,病毒能够严重影响鸡胚的生长发育甚至致死鸡胚,感染后的鸡胚内脏器官产生典型病变;使用200μL105TCID50/100μL的病毒通过肌肉注射途径感染SPF鸡,观察记录鸡的发病时间、精神状态、采食量、死亡情况以及剖检病理变化等,结果显示该分离株96h内可100%致死SPF鸡,并且鸡只感染后临床症状明显,感染后36小时发现有绿色粪便排出;解剖发现淡黄色心包积液,肝脏肿大发黄等典型的病理变化;病理组织学和分子生物学检查可见心、肝、脾等各组织器官都有病毒的存在且均出现不同程度的损伤。
本研究运用鸡肝癌细胞系对所采集的病料进行病毒的分离,并详细的对病毒在细胞上的生长特性进行分析,结果显示:病毒可以在鸡肝癌细胞上良好的生长和传代,在接毒后24小时就可以观察到明显的细胞病变;使用qRT-PCR方法进行检测后发现,病毒的毒量在盲传后快速升高,并第7代后逐渐趋于稳定;运用Reed-Muench方法计算病毒的最高滴度为107.8log10TCID50/100μL;运用透射电镜可以清楚的观察到病毒粒子的形态特征。
本研究应用膜包浓缩和Sepharose4Fast Flow(4FF)凝胶层析相结合的方法对病毒进行浓缩、纯化,通过图谱的分析、PCR鉴定以及回归细胞试验等,结果显示:本方法可以高效的对禽4型腺病毒进行纯化,能有效的防止病毒的流失,并且纯化后的病毒可以很好的保持其感染性和免疫原性。
本研究使用分离的病毒株分别对SPF鸡胚和SPF鸡进行感染试验,并对其致病性进行了详细的分析。通过绒毛尿囊膜感染SPF鸡胚后发现,病毒能够严重影响鸡胚的生长发育甚至致死鸡胚,感染后的鸡胚内脏器官产生典型病变;使用200μL105TCID50/100μL的病毒通过肌肉注射途径感染SPF鸡,观察记录鸡的发病时间、精神状态、采食量、死亡情况以及剖检病理变化等,结果显示该分离株96h内可100%致死SPF鸡,并且鸡只感染后临床症状明显,感染后36小时发现有绿色粪便排出;解剖发现淡黄色心包积液,肝脏肿大发黄等典型的病理变化;病理组织学和分子生物学检查可见心、肝、脾等各组织器官都有病毒的存在且均出现不同程度的损伤。