基于抗氧化—指纹图谱相关性及PPARs蛋白表达的中药糖脉康颗粒止消渴作用机制研究

来源 :成都中医药大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:fantasy2204
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糖尿病已是世界性公共卫生问题,给患者家庭带来沉重的经济负担,严重影响患者的生活质量。研究治疗2型糖尿病(T2DM)的新药是世界各国药物研发公司追逐的热点。糖脉康颗粒具有养阴清热,活血化瘀,益气固肾之功效。用于气阴两虚兼血瘀的T2DM等。目前对糖脉康颗粒的报道主要集中在临床效果观察上,对其治疗T2DM的机制研究较少,不利于中药在治疗糖尿病上的开展,有必要进行其确切机制研究。目的在中医药理论指导下,以氧化应激为切入点,采用多学科相结合的方法,探索糖脉康颗粒治疗糖尿病的机制及物质基础。方法1、采用体外清除1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)法、芬顿反应产生羟基自由基(·OH),邻苯三酚自氧化产生超氧阴离子(O2-·)法,对糖脉康颗粒进行抗氧化研究;2、分别采用HPLC-DAD、HPLC-ELSD方法,初步建立糖脉康颗粒的指纹图谱,使用化学对照品和药材对色谱峰进行定性、归属,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行相似度分析,采用SPSS软件对样品进行聚类分析;3、以SPSS、SAS、DAS软件对指纹图谱-体外抗氧化指标进行相关性分析。4、采用高脂加35mg/kg链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病模型,评价糖脉康颗粒的有效性;5、基于3T3-L1前脂肪细胞模型,采用蛋白免疫印迹(Western blotting, WB)法研究糖脉康颗粒对PPARs的影响;结果1、14批糖脉康颗粒对DPPH的平均IC50=0.71mg(生药量),40 mg(生药量)对·OH自由基的平均清除率为77.90%,13.33 mg生药量对O2-·的平均清除率为53.77%;2、分别建立了糖脉康颗粒的HPLC-DAD、HPLC-ELSD指纹图谱,HPLC-DAD标定共有色谱峰21个,标定5个对照品色谱峰,14批样品相似度大于0.80,14批样品可分为3类;HPLC-ELSD标定共有色谱峰24个,标定3个对照品色谱峰,12批样品相似度均大于0.80,两批相似度小于0.80;3、SAS软件对HPLC-DAD、HPLC-ELSD指纹图谱-抗氧化分析结果,前者清除DPPH与葛根素等12个色谱峰相关;清除·OH与原儿茶醛等10个色谱峰相关;清除O2-·与淫羊藿苷7个色谱峰相关;后者清除DPPH与黄芪甲苷等8个色谱峰相关;清除·OH与淫羊藿苷等9个色谱峰相关;清除O2-·与淫羊藿苷10个色谱峰相关。4、糖脉康颗粒可以降低血糖、大鼠饲料消耗量、饮水量、尿量,增加体质量,改善血液流变学指标及血液生化学指标,对胰腺有保护作用;可以明显提高总抗氧化能力(T-AOC)和超氧化物歧化酶(SOD)的活力,降低丙二醛(MDA)、癌基因(c-Myc)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核因子-kappa B (NF-κB)含量;5、糖脉康颗粒可以增加3T3-L1中过氧化物酶体增殖物激活受体α、δ、γ(PPARα、PPARδ、PPARγ)的蛋白表达;与模型组比较,糖脉康颗粒可以增加糖尿病大鼠肝脏组织中PPARβ的蛋白表达,降低PPARδ表达,高剂量增加PPARα表达,中剂量降低PPARα表达;结论1、糖脉康颗粒体内外均具有较好的抗氧化活性,其改善大鼠糖尿病症状机制可能与其抗氧化作用相关;2、糖脉康颗粒体外抗氧化作用主要与组方中淫羊藿(淫羊藿苷)、葛根(葛根素)、黄芪(黄芪甲苷)、丹参(丹酚酸B、原儿茶醛)与赤芍(芍药苷)等药材的化学成分相关;3、糖脉康颗粒对3T3-L1前脂肪细胞和糖尿病大鼠肝组织中的PPARs蛋白表达有影响。
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