【摘 要】
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小眼畸形相关转录因子（Microphthalmia-associated transcription factor,MITF）是黑色素细胞和黑色素瘤细胞中最为重要的一个转录因子。不仅调控着黑色素细胞的分化成熟,促使其分泌黑色素,也控制着黑色素瘤细胞的增殖、迁移和凋亡。因此,MITF成为了黑色素瘤基因治疗的一个靶点。miRNA可以通过与靶基因3端非编码区结合,继而使靶基因降解或抑制其翻译,使得靶基因
【基金项目】
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国家自然基金（No.31402156）； 国家自然科学基金面上项目（31873002）； 山西省重点研发计划（社会发展）项目（201803D31062）； 山西农业大学青年拔尖创新人才支持计划（No.TYIT201403）；
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小眼畸形相关转录因子（Microphthalmia-associated transcription factor,MITF）是黑色素细胞和黑色素瘤细胞中最为重要的一个转录因子。不仅调控着黑色素细胞的分化成熟,促使其分泌黑色素,也控制着黑色素瘤细胞的增殖、迁移和凋亡。因此,MITF成为了黑色素瘤基因治疗的一个靶点。miRNA可以通过与靶基因3端非编码区结合,继而使靶基因降解或抑制其翻译,使得靶基因无法正常行使其功能。而能否利用生物体内合成的miRNA,通过靶向作用于MITF来对黑色素瘤的恶化加以控制和治疗是一个有趣的方向。之前的体外研究表明miR-182-5p可以靶向识别MITF,并使其降解。由于肿瘤细胞的异质性,体外培养的黑色素瘤细胞无法完全模拟在体肿瘤细胞的环境,而移植瘤的出现很好地解决了这一个问题,可以顺利地进行肿瘤相关药物的筛选。本试验通过将一定数量体外培养的黑色素瘤细胞注入同源小鼠的右前肢皮下,使得肿瘤在体内环境中得以生长。待一定时间后,向肿瘤内多点注射agomiR-182-5p,观察不同组别小鼠体重和肿瘤大小,评价agomiR-182-5p在体内环境对肿瘤的作用。利用q RT-PCR对不同处理组织中MITF和下游TYR基因进行检测,发现经过agomiR-182-5p处理组的组织中MITF含量明显降低（P＜0.001）,TYR的表达也间接受到了抑制（P＜0.001）。利用western blot对不同处理组织中MITF和TYR蛋白进行检测,发现经过agomiR-182-5p处理组的组织中MITF蛋白含量明显降低（P＜0.001）,TYR蛋白也间接受到了抑制（P＜0.001）。Elisa对不同处理组织中EGF、IGF和VEGF三个生长因子进行检测,发现与正常皮肤组织相比,肿瘤组织中EGF、IGF和VEGF因子的表达显著上升（P＜0.001）,但不同miRNA处理的肿瘤组间无明显差异。综上所述,瘤内注射agomiR-182-5p可以显著抑制C57小鼠皮下移植瘤的生长速度;并在基因和蛋白水平显著抑制靶基因MITF和TYR的表达。与此同时,对肿瘤内生长因子EGF、IGF-1和VEGF的表达无影响。
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