AMD3100蛋白水平特异性阻断CXCR4对膀胱腔内种植转移的影响

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目的:研究CXCR4特异性拮抗剂AMD3100对高侵袭力人膀胱癌细胞亚株EJ-M3增殖、侵袭力、迁移力及腔内种植致瘤率的影响。方法:以人膀胱癌EJ-M3细胞亚株为模型,采用细胞计数板检测应用不同浓度AMD3100作用EJ-M3细胞后细胞生长曲线的变化;通过MTT法检测不同浓度AMD3100作用EJ-M3细胞后细胞增殖的变化;应用侵袭实验以穿透人工基底膜和孔径为8um的聚碳酸脂膜为依据,不同浓度AMD3100作用EJ-M3细胞24h后,Millicell小室法测定细胞的侵袭力;通过划痕实验检测应用不同浓度AMD3100作用EJ-m3细胞后迁移力的变化;通过应用AMD3100作用EJ-M3细胞观察实验组与对照组在裸小鼠膀胱腔内种植致瘤率的情况。结果:在体外实验中,细胞计数检测应用不同浓度AMD3100作用EJ-m3细胞后细胞生长曲线的变化发现应用AMD3100实验组与对照组其生长曲线明显降低,且表现出浓度的依赖性;MTT法检测显示应用AMD3100实验组与对照组比较其增殖速度明显降低,且表现出浓度依赖性;不同浓度AMD3100作用EJ-m3细胞24h, Millicell Chamber侵袭实验结果表明,随着浓度的增加细胞穿膜数逐渐减少(P<0.05);划痕实验检测对比高侵袭膀胱肿瘤细胞EJ-M3组与应用CXCR4特异性拮抗剂AMD3100的EJ-M3细胞组的迁移力变化情况,发现应用了CXCR4特异性拮抗剂AMD3100组的EJ-M3细胞与高侵袭膀胱肿瘤细胞EJ-M3相比,其迁移力在18h、24h均明显降低(P<0.05),且表现出浓度的依赖性;体内实验中我们成功构建了膀胱肿瘤腔内种植模型,并同时应用了CXCR4特异性拮抗剂AMD3100,观察发现应用了AMD3100的实验组(1/10)其膀胱肿瘤腔内成瘤率明显低于对照组(8/10)(P=0.019)。结论:成功在体外应用MTT法,侵袭实验,和划痕实验检测对比应用CXCR4特异性拮抗剂AMD3100的EJ-M3细胞组与高侵袭膀胱肿瘤细胞EJ-M3组的生物学特性,发现实验组其增殖生长及侵袭迁移能力明显低于对照组,并与浓度呈现出依赖性;通过构建膀胱肿瘤模型在体内观察对比发现实验组EJ-M3细胞成瘤率显著低于对照组。
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