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目的:研究Bcl-2 siRNA对胃腺癌细胞增殖的影响,并探讨采用Bcl-2 siRNA提高以5-FU为代表的化疗药物对胃腺癌治疗效果的可行性及其可能机制;也为克服其它实体瘤对化疗的耐药性提供启示。方法:设立Bcl-2转染组、阴性转染组、空白对照组;通过应用siRNA转染技术对胃腺癌细胞(SGC-7901)株中Bcl-2基因的表达进行特异性“沉默”;采用RT-PCR和Western blot方法分别检测siRNA-Bcl-2转染前后mRNA和蛋白水平,以确定其“沉默”效率;MTT法检测胃腺癌细胞增殖抑制率;PI单染流式细胞仪技术检测胃腺癌细胞凋亡率。结果:(1)通过应用siRNA转染技术,Bcl-2基因之mRNA的稳定表达水平被特异性地“沉默”;(2)Bcl-2基因特异性“沉默”,可以有效地降低Bcl-2的蛋白表达;(3)采用不同剂量5-FU(15、150、1500、15 000mg/L)治疗空白对照组、阴性转染组、转染组24小时。胃腺癌细胞增殖抑制率:转染组明显高于空白对照组和阴性转染组(P<0.05);(4)胃腺癌细胞凋亡率:转染组明显高于空白对照组和阴性转染组(P<0.05);Bcl-2-siRNA合并5-FU治疗时,转染组细胞凋亡率较空白对照组和阴性转染组也显著增加(P<0.05)。结论:(1)采用siRNA技术,可以有效“沉默”胃腺癌(SGC-7901)细胞株中Bcl-2基因mRNA水平,进而降低Bcl-2蛋白的表达水平;(2)Bcl-2-siRNA对胃腺癌细胞增殖可产生有效抑制;(3)针对Bcl-2的特异性siRNA,不仅诱导胃腺癌细胞出现了凋亡现象,还提高胃腺癌细胞对5-FU的敏感性;(4)肿瘤细胞内升高的Bcl-2稳态水平,是出现化疗药耐受现象的关键因素;除RNAi策略外降低肿瘤细胞内Bcl-2水平的其它措施,可能也可减弱或消除对化疗药的耐受现象;(5)本研究所采用的技术手段、以及本实验设计的逻辑,可能也可适用于克服针对其它化疗药出现的耐受、或者用于提高治疗除胃癌外的其它实体瘤的敏感性。