尼加拉瓜大刍草(Zea nicaraguensis)耐渍候选基因ZnCYP86的克隆及功能分析

来源 :四川农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fengxun1985
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渍涝胁迫是影响我国玉米生产的一个重要因素。栽培玉米经长期的人工选择与驯化,遗传基础十分狭窄,基本上丧失了耐渍特性。玉米的野生近缘种-大刍草生长在环境恶劣的自然条件下,’具有很多栽培玉米不具备的优良特征特性,尤其表现在抗逆性、抗病虫害等方面。野生近缘种的研究与利用,是拓宽玉米种质基础的重要途径之一。本研究以玉米野生近缘种尼加拉瓜大刍草(Zea nicaraguensis)为研究对象,利用同源克隆的方法克隆耐渍相关基因细胞色素P450基因(Cytochrome P450) ZnCYP86,并借助农杆菌介导法成功将ZnCYP86基因转入到模式植物烟草W38中进行研究。研究结果如下:1.ZnCYP86基因的克隆与分析:本实验从尼加拉瓜大刍草TZ04中克隆到耐渍关键基因CYP86,其参与了木栓质的生物合成。该基因全长1782bp,已提交GenBank, (ID:KF815742),其中CDS编码区1647bp,编码548个氨基酸。对其一级结构进行分析,结果表明此基因编码蛋白质为亲水蛋白,且蛋白质结构不稳定。2. ZnCYP86在玉蜀黍属TZ04中的定量表达:对TZ04在淹水时ZnCYP86的表达量做了分析,结果表明总体上ZnCYP86随着淹水时间的增加表达量逐渐上升,TZ04中的ZnCYP86的表达量随着淹水时间的延长迅速的变化。3. ZnCYP86在模式植物烟草中的表达:对转基因烟草T2的代耐渍性进行分析,并对不同淹水时间段转基因植株的SOD、POD、MDA、CAT四种酶活性进行测定,发现转基因烟草在淹水条件下四种酶活性与野生型对照没有明显的差异,推测植物在淹水条件下,ZnCYP86并不能通过诱导体内保护酶的产生来提高植物的耐渍性。对转基因烟草T2代根系凯氏带观察可以看出,含有ZnCYP86基因的烟草凯氏带没有加厚,在淹水条件下转基因烟草凯氏带的发育与空白烟草无明显差异,推测可能ZnCYP86表达量较低,通过观察其解剖学特性并不能确定差异。
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