利用RT—PCR.技术扩增传染性支气管炎病毒(IBV)J株N基因的ORF，并克隆到载体pMD18—T中。测序结果显示其N基因全长1230bp，编码由409氨基酸残基组成的N蛋白。与来自Genbank的另外8株IBV比较，J株与它们的核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为90％—98.8％与86.3％—97.9％。另外，将H52和J毒株稀释后以不同体积比例同胚接种9—11日龄的SPF鸡胚，并连续传二代，应用RT—PCR检测两毒株在鸡胚内可能发生重组而产生的重组子。结果，RT—PCR在所有代次和所有比例混合接种的鸡胚中均未检测到杂交的S1基因片段和/或N基因片段。　　 设计5条特异性引物，并在下游引物引入终止密码子。以含有S1基因的重组质粒pBV220—ZJ971—S、Teasy—M41—S1和pBS—J—S1为模板，通过PCR方法扩增得到S1D片段，并将其克隆到原核表达载体pET—28a(+)中，转染大肠杆菌BL21(DE3)，在IPTG诱导下，表达了融合6个His标签的S1D蛋白，通过SDS—PAGE和Western blot证实了重组蛋白的表达，并证明表达产物可与鸡抗IBV的阳性血清发生特异性反应。　　 用体外表达并纯化的三株不同组织嗜性(呼吸型、肾性和腺胃型)IBV S1D蛋白免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，对杂交瘤细胞进行筛选，阳性孔经三次有限稀释法克隆，成功获得9株杂交瘤细胞株。其中，抗ZJ971—S1D蛋白有4株即3A8、2D12、6E2和3H6；抗M41—S1D蛋白有2株即3C6、4F9；抗J—S1D蛋白有3株即4D10、4G7和6G4。9株单克隆抗体腹水间接ELISA效价为4.0×103—2.05×106(纯化抗原的包被浓度为0.21μg/每孔)。除3C6和4G7的重链为IgG2b外，其余单克隆抗体的重链均为IgG1；所有单克隆抗体的轻链均为κ链。蛋白印迹(Western—blot)和免疫细胞化学(ICC)鉴定结果表明，这些单克隆抗体能够与同源原核表达的S1D蛋白和真核表达的S1蛋白发生特异性反应；间接ELISA和ICC还表明，抗IBV三个毒株S1D蛋白的单克隆抗体之间具有一定程度的交叉识别。　　 应用非标记ELISA双抗体相加实验，测定了9株抗S1D蛋白单克隆抗体饱和相应抗原的最佳稀释倍数。在此基础上，测定了同源和部分异源的单克隆抗体之间的相加指数AI=23.9—98.4。把AI=50作为判定两个单克隆抗体是否识别同一表位的标准。结果表明，9株单克隆抗体共识别5个不同的抗原表位，分别命名为S1—A，S1—B，S1—C，S1—D和S1—E。其中，2D12和6E2识别S1—A表位；3A8识别S1—B表位；3H6和3C6识别S1—C表位；4F9识别S1—D表位；4D10，4G7和6G4识别S1—E表位。总之，S1—C和S1—D表位存在于IBV(ZJ971、M41和J)S1亚基内；S1—A和S1—B表位存在于两个IBV(ZJ971和M41)S1亚基内；而S1—E表位是J毒株特异性的。