当归的谱效相关性研究及光毒性化合物的含量测定

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中药中含有多种成分,其药效是其所含各种成分相互作用的结果。目前,《中国药典》以其中一种指标性成分来评价中药材的质量,但有时指标性成分与有效成分并不一致,所以只测定其中的一个指标性成分并不能很好地控制中药质量。指纹图谱由于其专属性在评价中药质量方面有一定的优势。由于中药中各化学成分的极性差异较大,使用单一溶剂处理样品建立的指纹图谱可能会忽略中药中的不同极性组分。本文采用不同的溶剂对当归药材进行处理,研究各提取部分的指纹图谱,同时比较了不同提取部分的药效,找出最优药效部分。在药效学数据的基础上,结合指纹图谱进行了谱效相关性研究。为基于药效的当归药材质量控制提供了技术支持。当归药材及浓缩当归丸中含有香豆素类化合物,该类物质具有光毒性。正常用法、用量时不会产生毒性,长期或大量使用时,会导致该类物质在体内蓄积,从而产生毒性反应,因此必须严格控制当归药材及浓缩当归丸中该类化合物的的含量。本论文将从四个方面展开:第一章当归药材不同提取部分指纹图谱的研究采用高效液相色谱法和气相色谱法,对10批当归药材的不同提取部分进行指纹图谱研究。用中药色谱指纹图谱计算机辅助相似性评价系统软件对数据进行分析,并对方法进行评价。结果显示,所建立的10批当归药材不同提取部分的指纹图谱可以全面表征当归药材中化学成分的分布,首次鉴别了其中的7个主要指标成分。本方法准确可靠,可以作为当归药材及其制剂质量控制的参考依据。第二章当归补血活血谱效关系的研究用皮下注射化学试剂乙酰苯肼(APH)法复制小鼠血虚模型,比较当归不同提取部分对血虚小鼠血象、脏器及体重等指标的影响,用灰色关联统计方法将HPLC指纹图谱各共有峰的峰面积和补血、活血药效数据相关联,研究谱效相关性。结果显示,水提醇沉上清(SCS)部分补血、活血效果较好。根据关联度大小确定了SCS中各成分对补血、活血作用贡献程度。其中,阿魏酸的贡献最大,但不应忽略其他成分的贡献。本文研究有效组分的HPLC指纹图谱及谱效关系,确定了SCS部分补血、活血的物质基础,为表征其谱效相关性提供有效途径。第三章当归补气作用谱效关系的研究用疲劳加饥饿的方法复制小鼠气虚模型,比较当归不同提取部分对气虚小鼠单核巨噬细胞的吞噬能力及免疫器官等指标的影响;用灰色关联统计方法将HPLC指纹图谱各共有峰的峰面积和补气药效数据相关联,研究谱效相关性。结果显示,当归70%乙醇提取(CTW)部分对气虚症状有一定的改善,用灰色关联的分析方法,根据关联度大小确定当归醇提物中各成分对补气作用的贡献大小,其顺序为(按特征峰编号)为:18>5>7>12>17>4>19>2>20>6>8>3>14>1>16>11>9>13>15>10。其中7,10,11,13,17,18和20号峰分别为阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、藁本内酯、丁烯基苯酞和欧当归内酯A。说明,HPLC特征图谱与补气作用之间有一定相关性。第四章当归及浓缩当归丸中光毒性化合物香豆素的含量测定建立了用超高效相液相色谱法同时测定浓缩当归丸和当归药材中光毒性化合物补骨脂素、花椒毒素和佛手柑内酯含量的方法。样品用甲醇超声提取后,用Waters ACQUITY BEH-C18柱(100mm×2.10mm,1.7μm)分离,以乙腈-水做流动相,梯度洗脱,柱温为30℃,流速为0.45mL/min,检测波长为245nm,进样量为3μL。结果表明,在一定的浓度范围内,补骨脂素、花椒毒素和佛手柑内酯的浓度与峰面积线性关系良好,相关系数r为0.9992-0.9996,样品的加样回收率为96.20%-102.42%,RSD为1.49%~2.97%。本方法简便、快速,精密度高、重现性好。本方法可用于浓缩当归丸和当归药材中光毒性化合物补骨脂素、花椒毒素和佛手柑内酯的含量测定。
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