[目的]发现陕产黄花油点草活血作用有效部位;研究不同剂量下的血清指纹图谱,确定服用剂量;比较相同剂量下片剂、滴丸剂的血清指纹图谱,进行剂型的选择,探索利用血清指纹图谱指导制剂设计研究的新思路。[方法]采用性状、显微、薄层层析等鉴别方法,建立药材生药学鉴别依据,确定药材来源;采用系统溶剂法提取样品、利用颜色检识反应确定药材含有成分类型;采用寒凝血瘀动物模型,通过比较2.5g/kg、5g/kg、10g/kg等不同剂量下小鼠耳廓微循环实验,初步确定给药剂量,并进一步以确定的剂量进行小鼠耳廓微循环、小鼠出、凝血实验、大鼠抗血栓形成实验,比较水、70%乙醇、甲醇、乙酸乙酯、正丁醇、95%乙醇等不同溶剂提取部位的活血作用;进一步对水提取部位通过大孔吸附树脂进行分离,得到水洗除杂、20%、40%、60%、80%、95%等不同浓度乙醇洗脱部位。采用薄层层析法,以含药血清(浆)为对照,比较各洗脱部位在与对照品Rf值相同处是否相同颜色斑点,进行部位合并;通过对不同合并部位进行小鼠耳廓微循环实验、小鼠出、凝血实验、大鼠抗血栓形成实验、急性缺血性脑梗阻大鼠实验,确定活血作用有效部位;采用颜色检识反应判断有效部位成分类型;采用紫外分光光度法以总黄酮为指标,以平行实验确定提取方法、加水量、煎煮次数,以正交实验优选总黄酮部位提取工艺,并对其合理性进行验证;以每克树脂纯化转移总黄酮的量为指标,通过考察动态吸附-解吸附、静态吸附-解吸附过程,对AB-8、D-101、HPD-450、HPD-600、HPD-700 5种大孔树脂进行筛选。再进一步以吸附率或解吸附率为指标对提取药液质量浓度、洗脱剂用量、树脂用量、径高比、药液的pH值、上样速度、洗脱速度、洗脱剂浓度等因素进行平行实验考察其对树脂纯化工艺的影响,确定纯化最佳工艺条件,并对其合理性进行验证实验;采用紫外分光光度法测定合并部位的总黄酮含量;采用高效液相色谱法,测定烟花苷含量,研究总黄酮部位的指纹图谱;选择分离度、峰形均较好,具有较大峰面积的峰作为内参照峰,对内参照峰出峰个数及峰面积按照公式Xii,j(Xi,j-Xkj)/Sj,进行标准化处理(式中Xi,j为不同时刻的峰总面积,Xj为不同时刻总面积的平均值,Sj为不同时刻峰总面积的标准偏差,即Si=(?),X’i,j标准化后的值),按照公式Yλ=(YA+Yn)/2即得综合评价指标Yλ值(Yλ为波长在λnm下的特征值;YA为总面积的标准化值;Yn为峰个数的标准化值),以Y值大者为最佳。对每组的Y值进行相关性检查,结合出峰保留时间的RSD值,对指纹图谱进行相似度描述。采用高效液相色谱法,建立含药血清指纹图谱测定方法,通过比较0.25g/kg、1.25 g/kg、2.5g/kg、5 g/kg、7.5g/kg、10 g/kg在 15min、30min、45min、1.0h、1.5h、2.0h、3.0h、4.0h、6.0h、8.Oh时血清指纹图谱的基础上,进行0.08g/kg、0.17g/kg、0.5g/kg、0.75g/kg、1g/kg在15min、45min、1.5h时的血清指纹图谱,对每个时间点的图谱,选择空白血清中没有、且具有较好分离度、具有一定的峰面积的峰作为特征峰,对出峰个数及峰面积进行标准化处理,通过对比各剂量组之间的差异性,结合标准化值,确定最佳剂量;对有效部位进行片剂、滴丸剂的制备,通过进行初步的制剂质量检查及体外溶出度的研究,初步确定供试品。研究相同给药剂量下片剂、滴丸剂在15min、30min、45min、1.Oh、1.5h、2.Oh、3.0h、4.0h、6.0h、8.0h时的血清指纹图谱,根据组间有无差异性,结合标准化值,确定制剂设计的剂型。[结果]秦岭产油点草为百合科黄花油点草(Tricyrtis maculata(D.Don)Machride)的干燥全草。陕产黄花油点草中含有酚性成分、游离生物碱、黄酮、氨基酸、多肽、蛋白质,无α-酚羟基或邻二酚羟基结构的羟基蒽醌,氰化物,多糖,内酯香豆素类等成分类型;不含皂苷、强心苷、香豆素、甾体萜、挥发油类成分。水提取部位、70%乙醇提取部位、甲醇提取部位均具有明显改善血液循环作用,水提取部位能显著延长小鼠凝血时间,水提取部位具有抗血栓形成作用。40%、60%、80%乙醇洗脱部位与给药动物血液在Rf值相同处有相同颜色斑点,将此三部分合并作为醇洗部分,其余合并后作为其他部位;醇洗部位具有极其显著地改善小鼠耳廓微循环、延长出凝血时间、抗血栓形成作用,且有显著地改善急性脑缺血型脑梗塞大鼠的神经行为及有效减少大鼠脑梗死面积的作用。醇洗部位主要为总黄酮类成分,其他部位含有少量的黄酮、酚性成分、氨基酸与多肽蛋白质、有机酸、蒽醌类以及糖类等成分类型。总黄酮部位最佳提取工艺为浸泡15 min,煎煮三次,分别加入40、35、35 倍水,煎煮 1h、30min、30min。AB-8、D-101、HPD-450、HPD-600、HPD-700 五种大孔吸附树脂中,AB-8型大孔吸附树脂对该药材总黄酮部位纯化作用突出,其最佳纯化工艺参数为药液浓度为1.2g/ml,生药材:树脂为1:3,药液pH=6.47,径高比为1:5,洗脱液浓度为40%,上样速度为1BV/h,洗脱速度为1BV/h,洗脱体积为2BV。3000g药材水提取后,经纯化得到40%乙醇洗脱部位281.8g,60%乙醇洗脱部位88.3g,80%乙醇洗脱部位48.2g,各干膏中总黄酮含量分别为54.74%、36.57%、21.00%。这三部分合并后的总黄酮总黄酮含量为49.66%。色谱柱:Thermo Hypersil GOLD;流动相:(A)C2H3N 与(B)0.4%H3P04-H20 梯度洗脱:0～30min,A(%)15→25;30～80min,A(%)25-→55;80～90min,A(%)55→95,流速 1ml/min,进样量:10ul柱温20℃,检测波长360nm条件下,测定药材中烟花苷含量为0.747%,总黄酮部位烟花苷含量为1.075%,建立的总黄酮部位指纹图谱相关性显著,相似度高。色谱柱:Thermo Hypersil GOLD,流动相:(A)C2H3N 与(B)0.2%H3P04-H20 梯度洗脱:0～30min,A(%)30→33;30～35min,A(%)33→38;35～40min,A(%)38→52;40～85min,A(%)52→70,检测波长:220nm,进样量:20ul,柱温:20℃,测定血清指纹图谱方法合理、可行。0.25g/kg、1.25 g/kg、2.5g/kg、5 g/kg、7.5g/kg、10 g/kg、0.08g/kg、0.17g/kg,0.5g/kg,0.75g/kg,1g/kg 等剂量组无显著性差异,各组 Ymax 分别为 1.803、1.513、1.429、1.392、1.313、0.703、0.633、0.243、1.146、0.861,以 0.25g/kg 的 Y 值最大,选择0.25g/kg为给药剂量。片剂、滴丸剂无显著性差异,片剂Ymax出现在30min其值为1.846,滴丸剂Ymax出现在2h其值为1.027,因此选择片剂作为制剂开发剂型进行研究。[结论]所建立的生药学鉴别依据、HPLC法测定有效部位指纹图谱、血清指纹图谱合理、可行。总黄酮为陕产黄花油点草活血作用的有效部位。0.25g/kg为最佳服用剂量,片剂剂型优于滴丸剂剂型。以血清指纹图谱指导剂型选择可实现,为陕产黄花油点草有效部位研制创新制剂,合理开发利用该药材资源奠定良好基础。