论文部分内容阅读
背景与目的: 微波是频率为300 MHz~300 GHz的电磁波,广泛应用于通讯、医疗、军工等领域和日常生活,同时具有广泛生物效应。人们暴露在微波辐射下的机会日益增加,微波辐射损伤的主要敏感靶部位有中枢神经系统、生殖系统、心血管及免疫系统等,其中尤以中枢神经系统最为敏感,研究也较多。如何防护和减小微波辐射对机体的损伤效应成为了当前的热点。其防护措施目前仍以物理防护为主,以各种含金属丝等屏蔽或吸收材料的防护服应用最为广泛。此外,一些微波辐射防治药物,国内外也都屡有报道,但仍缺乏比较令人信服的实验数据,抗微波辐射药物的研究也相对滞后。 抗辐灵是一种新型抗微波辐射损伤的中药复方,按照“君臣佐使”原则由黄芪、赤芍、丹参和红萍等原料制成。实验室(军事医学科学院放射与辐射医学研究所)前期研究表明,抗辐灵复方对微波辐射致大鼠学习记忆能力和组织结构的损伤具有保护改善作用[1],但具体到哪种活性成分起主要作用及相关的有效剂量是多少,发挥保护作用的机制如何等都待进一步的实验研究证明。因此,本研究以神经元样细胞为观察对象并试图从氧化应激相关指标入手,旨在探讨活性成分黄芪总苷、赤芍总苷和丹参酮对PC12细胞的作用,为阐明抗辐灵保护微波辐射损伤的机制、寻找新的抗微波辐射损伤药物和进行下一步的动物实验奠定基础。 材料与方法: 体外传代培养PC12细胞,NGF(nuclear factor-E2-related factor2)诱导其分化为类神经元,培养5~7 d,将其随机分为正常对照组、辐射对照组、黄芪总苷(1μg/ml、3μg/ml、9μg/ml)组、赤芍总苷(1μg/ml、3μg/ml、9μg/ml)组、丹参酮(1μg/ml、3μg/ml、9μg/ml)组。分别给予1μg/ml、3μg/ml、9μg/ml黄芪总苷、赤芍总苷、丹参酮作用48 h后,经30 mW/cm2微波辐射6 min,于辐射后即刻采用倒置相差显微镜观察PC12细胞形态变化,四甲基偶氮唑盐比色(methylthiagolyl tetragolium,MTT)法测定细胞生存率,活性氧探针(dichlorodihydrofluorescin diacetate,DCFH-DA)法测定细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)法测定细胞脂质过氧化代谢产物丙二醛(malonydialdehyde,MDA)含量。采用军事医学科学院的微波辐射源均匀辐射,平均功率密度为30 mW/cm2,辐射时间6 min。假辐射组进行同等条件伪辐射。 结果: 1. PC12细胞诱导分化成类神经元:倒置相差显微镜下观察可见,未分化的PC12细胞呈圆形,折光性好,加入 NGF将其诱导分化后细胞两端逐渐长出细长突起,可交织成网,分化后5~7d类似成熟类神经元。 2.辐射前后PC12细胞形态:黄芪总苷、赤芍总苷、丹参酮作用后经微波辐射各组PC12细胞形态未见明显差异。 3. PC12细胞生存率:辐射后6 h,辐射组PC12细胞较假辐射组生存率明显降低(P<0.01);与辐射组比,3μg/ml黄芪总苷给药组PC12细胞生存率明显提高(P<0.01)。 4. ROS和MDA水平:辐射后0 h和48 h,辐射组PC12细胞ROS、MDA水平明显升高(P<0.01),与辐射组比,各药物预处理组 PC12细胞 ROS、MDA水平均显著降低(P<0.05)。 结论: 抗辐灵活性成分黄芪总苷、赤芍总苷、丹参酮能改善微波辐射对PC12细胞的损伤,其保护作用可能是通过清除氧自由基和减轻氧化应激损伤来实现的。