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目的:了解合肥某院肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumonia,KP)和其耐药菌株的临床分布及对各种抗菌药物的耐药性,研究耐碳青霉烯类肺炎克雷伯(Carbapenemsresistant Klebsiella pneumonia,CRKP)的携带耐药基因和毒力因子特异性,为临床的用药和院感提供辅助依据。方法:监测2015年1月~2018年12月医院临床分离肺炎克雷伯菌耐药情况,用Vitek-2Compact全自动微生物系统对细菌进行鉴定、药敏试验,参考美国临床实验室标准化委员会(CLSI)文件2015版进行对结果进行判读。纸片法完成头孢哌酮/舒巴坦药敏检测,参见头孢哌酮折点判读。借助WHONET5.6软件系统分析。收集2015年1月~2017年1月合肥市第一人民医院南区分离的CRKP共38株,细菌复苏后完成鉴定和药敏实验同上,MIC试纸条法检测替加环素,纸片法检测头孢哌酮/舒巴坦,其它均采用纸片法复核。替加环素参照美国食品药品监督局(FDA)推荐的判读折点,孢哌酮/舒巴坦参照头孢哌酮判读。采用改良Hodge试验、EDTA协同试验进行耐药表型检测,PCR及基因测序检测相关耐药基因和毒力相关基因,细菌膜蛋白SDS-PAGE对部分膜蛋白缺失菌株进行验证。结果:2015年1月~2018年12月期间,临床分离肺炎克雷伯菌999株,主要为痰和尿液标本,主要分布于老年科和ICU病区,对多数抗菌药物仍保持较好的敏感性,但2018年间抗药性显著上升。4年间共检出CRKP166菌,主要分布于老年科、ICU病区,CRKP的数量和药敏结果在2018年均有较大变化,需引起关注。收集用于研究的38株CRKP菌株,头孢菌素类、碳青霉烯类等药物的耐药率最高均≥80.0%,庆大霉素和磺胺甲噁唑的耐药率>65.0%,对阿米卡星、左氧氟沙星、环丙沙星和替加环素保持一定的敏感性。检出32株(84.2%)菌株携带了碳青霉烯酶耐药基因,其中KPC-2型26株(68.4%),NDM-1型12株(31.6%),同时携带KPC-2和NDM-1 6株(15.8%);31株(81.6%)携带ESBLs基因;25株(65.8%)存在膜孔蛋白基因缺失;6株(15.8%)不携带碳青霉烯酶基因的CRKP中:2株(5.3%)携带ESBLs基因且膜孔蛋白缺失,2株(5.3%)仅携带SHV+CTX-M+TEM基因,2株(5.3%)仅携带SHV+CTX-M基因。对2株膜孔蛋白缺失和2株膜孔蛋白不缺失的菌株进行膜蛋白SDS-PAGE验证发现与基因检测结果一致。共检出荚膜K1型5株,K57型1株,其它32株属于尚未分型。rmp A阳性16株,aerobaction阳性12株,其中10株两者均阳性。所有菌株Fim H-1均阳性。结论:临床分离的肺炎克雷伯菌主要为痰和尿液标本,主要分布于老年科、ICU病区,对多数抗菌药物保持较好的敏感性,但耐药性在2018年明显上升。CRKP主要的分布在老年科、ICU病区。本次研究的CRKP携带多种耐药基因以KPC-2为主,另外检出高毒力相关血清K1型应引起重视。