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小麦种质98-199是用抗赤霉病抗源苏麦3号为母本,英国抗三锈抗源C39为父本杂交,获得F1后,再与抗条锈病抗源贵农21杂交,经多代选育而成的新种质。本文运用RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA,随机扩增多态性DNA)技术,采用分离群体分组分析法(Bulked Segregate Analysis,BSA)对小麦抗病种质98-199抗条锈病基因进行分子标记,筛选出1条与抗条锈病基因连锁的引物,并对抗病和感病群体进行了验证。 1、以感病品种西农2302为母本与抗病种质98-199杂交,对杂交后代148株F2分离个体和双亲,以小麦条锈病当前流行生理小种条中32号接种进行抗病性鉴定。结果其中的113个单株表现抗病,35个单株表现感病,卡平方(x2)测验表明,x02=0.144<x0.05,12=3.84,说明F2群体的抗感分离比例符合3R:1S,初步确定98-199的条锈病(CY32)抗性是由一对显性基因控制。 2、依据BSA方法建立抗病池和感病池,通过RAPD实验,从314个引物中筛选出9个能在双亲及抗病池和感病池间具有多态性的引物。其中只有引物S124(GGTGATCAGG)能在抗病亲本98-199和抗病池中扩增出大小约为1260bp的标记带,而在感病亲本西农2302和感病池中不能扩增出该标记带,经3次重复均能得出相同的结果。把98-199抗条锈病基因的分子标记记为S1241260,用F2分离群体进行遗传连锁性分析,结果113个抗病单株中有102个抗病单株具有此标记,另外11个抗病单株与35个感病单株均无此标记带。经计算,标记与抗病基因间的遗传距离为7.46±2.26cM,说明该标记是与98-199抗条锈病基因相连锁的一个RAPD标记。 3、用引物S124对98-199与绵阳26、98-68两个感病亲本杂交后代的F2抗感单株进行RAPD检测。结果在98-199和各组合的抗病单株中都能扩增出S1241260标记,而在感病亲本和各组合的感病单株中均缺乏该标记,说明S1241260标记与98-199抗条锈病基因紧密连锁,在杂交育种过程中易于伴随抗病基因遗传,因此可有效利用该标记进行分子辅助选择。 4、利用引物S124对98-199的亲本贵农21、苏麦3号和C39进行RAPD检测,结果显示:在98-199、贵农21中均可扩增出大小约为1.26kb的特异片断,而在苏麦3号、C39中未出现此特异带。表明98-199中的抗条锈病基因可能来自于贵农21。