鸡传染性支气管炎病毒保守基因片段的克隆及分子生物学检测技术的研究

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本文根据套式PCR的原理设计了2对引物(P3/P4,P5/P6),应用RT-nested-PCR 技术对传染性支气管炎病毒M41株、T株、H120株、H52株、上海地方毒株及对照法氏囊病毒、新城疫病毒和禽流感病毒感染的鸡和自然发病鸡组织病料进行了检测,均可扩增出与预期大小相符的280bp的片断。试验表明,该RT-nested-PCR技术对传染性支气管炎的检测具有快速、简便的优点,不仅适用于对鸡胚毒的检测,还适用于对病死鸡组织病料的检测,是传染性支气管炎鉴别诊断和流行病学调查的颇具潜力的分子生物学诊断方法。 本研究进一步对IBV在感染鸡体内的动态分布进行研究,利用所建立的RT-nested-PCR方法对攻毒后第3、7、14、21和28天采集的肾脏、气管、盲肠扁桃体、肺脏和肝脏进行检测,结果发现IBV各毒株在体内有不同的组织嗜性,在攻毒第3和第7天:5个毒株组均可从肾脏、气管、肝脏、肺脏和盲肠扁桃体中检测到IBV存在。 本研究还对一株鸡传染性支气管炎病毒上海分离株(SH)的核蛋白基因进行RT-PCR和序列测定分析,并对其编码蛋白进行了分析。
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