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G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptors, GPCRs）,因介导细胞间通讯和细胞内信息传递而具有重要的生理功能和病理意义。GPCR一直是最重要的药物靶点,也是药理学研究的重要内容。据测算,人类GPCR的总数在900个左右。其中,配基与功能均属未知的GPCR,即孤儿GPCRs （orphan GPCRs, oGPCRs）,大约有100个左右。鉴于GPCR的重要性,如何筛选确认oGPCR的配基,进而探索其功能已成为oGPCR研究领域的关键内容。前者,通常被形象地称为oGPCR的“去孤儿化”（Deorphanization）。本研究主要包括两部分：一是利用GPCR与G蛋白偶联的特性,将几个oGPCR分子与G蛋白亚基进行融合并表达融合蛋白,为实现oGPCR的配基筛选奠定基础；二是对新近“去孤儿化”的GPR80受体进行了功能初探。主要结果总结如下。在本实验第一部分中,我们根据oGPCR数据库的信息,分别克隆人孤儿受体成员GPR45（GenBank Accession number:NM007227）, GPR85（GenBank Accession number:NM018970）, GPR174（GenBank Accession number:NM032553）与Gilα的完整编码区,测序完全正确后,通过重叠延伸（splicing by overlap extension, SOE）PCR技术将二者进行融合,然后将融合基因克隆到供体质粒pFASTBac1中,而后转化DH10Bac,使含融合基因的重组供体质粒实现位点的特异性转座,得到重组杆状病毒穿梭质粒。将该重组杆粒转染昆虫sf9细胞,制备含有重组杆状病毒母株的上清。利用合适滴度的病毒上清,感染sf9细胞一定时间。经Wester Blot检测证实,sf9细胞成功表达了相应的oGPCRs-Gilα融合蛋白。而且,在重组病毒感染强度（multiplicity of infection,moi）为5、感染时间为72h的条件下,各融合蛋白的表达含量较为丰富。在本实验第二部分中,我们探讨了GPR80受体在肾小管上皮-间充质转分化（Epithelial-mesenchymal transdifferentiation, EMT）中的可能作用。GPR80是新近实现“去孤儿化”的oGPCR成员。我们选择人近端肾小管上皮细胞系HK-2细胞为研究对象,分别在低糖（5mM）和高糖（30mM）条件下探索TGFβ-1与EMT的关系。然后利用TGF-β1（5ng/ml）诱发的HK-2细胞EMT病变模型,着重观察了高糖（30mM）条件下α-酮戊二酸钠对HK-2细胞EMT病变的影响。结果发现,α-酮戊二酸钠在100和500μM时均明显抑制EMT病变的发生发展,表现为上皮标志物E-cadherin表达显著升高（P<0.01）,间叶组织标志物Vimentin表达显著降低（P<0.01）,此过程还伴随着其受体GPR80的表达上调。本发现结果首次证实,α-酮戊二酸钠具有逆转EMT的作用,预示着α-酮戊二酸（盐）及其受体介入了DN的发病过程。一是为深入认识α-酮戊二酸（盐）受体的生理功能及病理意义提供了关键数据,二是为DN的防治提供了新的潜在靶点。结论：成功实现了3个oGPCR分子与Gi1α的融合并利用昆虫sf9细胞使之表达,为实现oGPCRs分子的高通量筛选打下了基础；发现GPR80及其配基介入了EMT的发生发展过程,预示着该受体可作为糖尿病肾病等终末期肾脏病变的潜在防治靶点,值得深入研究。