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本试验以南方根结线虫(Meloidogyne incognita)为靶标,利用本实验室前期筛选出来的具高活性杀线虫真菌Snef5 (Simplicillium chinense)菌株为试材,对该菌株产杀线虫活性代谢产物的发酵条件进行了单因素法和响应面法优化试验,为进一步分离纯化杀线虫活性物质及其发酵产业化奠定培养基础。取得了如下研究成果:1.根结线虫生防真菌Snef5发酵工艺的单因素优化试验:适合该菌株产杀线虫活性的单因素发酵培养基及发酵条件初步确定为:优势碳源为蔗糖,且用量4%-5%为宜,优势氮源为0.8%硫酸铵,0.04%硫酸镁,0.002%硫酸亚铁,0.02%氯化钾,0.2%磷酸氢二钾;初始pH值为偏弱酸或中性;转速选为120 r/min左右;发酵时间选在10 d左右;对摇瓶装液量要求不高,在后续的试验中选择150mL/250mL的装液量。单因素优化为进一步提高菌株发酵液杀线虫活性提供了基础发酵参数。2.响应面法优化根结线虫生防真菌Snef5的发酵工艺研究:首先,采用Plackett-Burman法筛选出有显著效应的3个因素:初始pH值、蔗糖和硫酸镁用量,而后通过最陡爬坡试验设计、Box-Benhnken试验设计和响应面分析法对其试验结果进行分析,获得了优化的最佳发酵条件和发酵培养基组成:初始pH值为6.74,发酵时间8 d,转速120 r/min,蔗糖含量4.19%,硫酸镁含量0.04%,硫酸铵1.0%,磷酸氢二钾0.2%,硫酸亚铁0.0025%,氯化钾0.025%。经摇瓶发酵和发酵罐发酵验证,该理论的预测值与验证试验的实测值无显著的差异;优化后的发酵液杀线虫活性与原始发酵液相比,摇瓶发酵与30 L发酵罐产出的发酵液对南方根结线虫二龄幼虫的致死率分别提高了20.6%和21.3%,显示出较好的优化效果。为研究发酵产物中杀线虫活性物质的分离纯化和生防菌的产业化奠定了良好理论基础,同时,该研究结果也将为其他生防真菌的发酵工艺提供数据参考。