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阪琦肠杆菌(Enterobacter sakazakii)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、沙门氏菌(Salmonella)等常见的食源性致病菌,虽然不是致命的,但是会引起严重的食源性疾病。如今病原性食品安全已经成为当今社会的热点话题,传统的食源性病原免疫学、分子生物学等检测方法,已经不适应当今食品安全需求,研究快速、灵敏、经济、特异性强食源性病原新型检测方法,已经成为解决食品安全问题的一个重要趋势。二十世纪八十年代逐步发展起来的胶体金免疫层析试纸条,具有快速、低成本、便携等优点受到广泛青睐。然而传统的胶体金免疫层析试纸条的制备通常需要筛选待检测细菌的特定抗体,这个过程既耗时又艰难,而且食品样品中生物体之间的同质性很容易导致免疫分析的低特异性。另外由于没有进行信号放大的实验,灵敏度低也是传统试纸条的一大缺点。本实验所开发的核酸试纸条将传统试纸条进行了改进,用于检测食源性细菌的核酸,经LCR、PCR扩增可以显著提高检测的灵敏度。根据标记在核酸上的生物素、FAM和地高辛能与试纸条上的链霉亲和素、抗FAM抗体和抗地高辛抗体特异性结合来达到检测的目的,从而避免自行筛选抗体造成特异性低的问题。在本实验中主要包括以下四个部分:1)优化胶体金连接链霉亲和素的实验条件,制备两种类型的核酸试纸条,即1号试纸条和2号试纸条。结果显示,胶体金标记链霉亲和素的最优pH为7.0,最优链霉亲和素浓度为0.6 mg/ml。2)利用连接酶链式反应(LCR)对金黄色葡萄球菌的DNA进行扩增,优化LCR实验条件,利用1号试纸条检测LCR产物,分析其特异性及灵敏性。结果显示,15μl的LCR体系中最优探针浓度为0.1μM,最佳酶用量为2U,试纸条检测除金黄色葡萄球菌外的其它八种细菌特异性良好,检测极限为10 fM。3)阪崎肠杆菌的PCR产物与两种特异性探针杂交后应用于1号试纸条上,优化探针浓度,分析该方法的特异性和灵敏性。结果显示试纸条检测阪琦肠杆菌的最优探针浓度为0.5μM,检测除阪琦肠杆菌外的七种细菌特异性良好,检测极限可达7.86 cfu/ml,即便混入5.5×107 cfu/ml的沙门氏菌菌液对检测灵敏度仍无影响。4)大肠杆菌和沙门氏菌的PCR产物与四种特异性探针杂交后应用于2号试纸条上,优化四种探针浓度,分析该方法的特异性及灵敏性。结果显示同时检测大肠杆菌和沙门氏菌的最优探针浓度为0.5μM,检测特异性良好,检测极限为10 cfu/ml,即使在混入8.6×106 cfu/mL的金黄色葡萄球菌的情况下,检测灵敏度依然无影响。