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长期以植物韧皮部汁液为食的稻飞虱,其体内均存在内共生菌。类酵母共生菌(Yeast-like symbiotes,YLS)是存在于稻飞虱体内优势菌群,与稻飞虱的生长、发育和繁殖息息相关。已有研究证明,稻飞虱体内不止存在一种类酵母共生菌,而且共生菌的数量随着稻飞虱生长环境的变化而变化。本实验以褐飞虱为研究对象,结合巢式PCR和变性梯度凝胶电泳(DGGE)对类酵母共生菌18SrDNA和5.8S-ITS rDNA的部分序列进行分析,不仅建立了检测褐飞虱体内共生菌多样性的方法,而且通过实时荧光定量PCR(qPCR)和DGGE探知三种类酵母共生菌在不同虫龄以及不同抗性水稻饲养下的褐飞虱体内的变化规律。将得到的结果总结如下:1.建立了巢式PCR-DGGE检测褐飞虱体内共生菌多样性的方法:以NS1-NS8和NS5-ITS4作为外围引物进行巢式PCR的首轮扩增,然后以此扩增产物为模板,NFGC/NR、 ITS1FGC/ITS2和ITS1GC/ITS2为内引物进行目标片段的特异性扩增。利用此方法不仅快速检测到已经报道的Noda菌、季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii)、假丝酵母(Candida),还包括其他的真菌,例如Saccharomycetales sp., Debaryomyces hansenii和一些uncultured fungi。相对于传统的菌种鉴定方法,此方法为我们提供一个比较全面的鉴定飞虱体内类酵母共生菌种类的途径,为飞虱体内共生菌的多样性的研究奠定基础。2.通过对三种类酵母共生菌(Noda菌、Pichia guilliermondii、Candida)在褐飞虱不同龄期中的拷贝数分析发现,Noda菌在褐飞虱各个龄期的数量均显著高于其他两种菌,再次验证Noda菌的数量在三种共生菌中占有绝对优势。另外对三种菌各自在褐飞虱不同龄期5组样品中的变化规律分析发现,三种菌呈现相近的变化规律,在4龄若虫期之前,共生菌的数量均随着虫龄的增加而增加,在5龄若虫期数量有显著的下降趋势,而到成虫期数量又有显著地回升。3.利用DGGE和qPCR,分析Noda菌、Pichia guilliermondii和Candida三种类酵母共生菌在褐飞虱适应抗性品种前八代的变化规律发现:在适应抗性品种的过程中数量急剧下降,在第二代时三种共生菌数量达到最低,到第三代时,数量开始回升,之后趋于平缓。然而,在同一世代上的三种共生菌的数量变化不尽相同:Pichia guilliermondii和Candida在三种抗性水稻(ASD7、RH、Mudgo)上的差异不显著,但是对于Noda菌而言,在三种抗性水稻上的差异显著,尤其在抗性水稻Mudgo上,Noda菌的数量在三种水稻上最低,与另两种抗性水稻相比数量明显较少。在前4代,Noda菌的数量与感虫品种相比达到极显著水平。分析褐飞虱体内三种共生菌原始拷贝数发现:Noda菌在三种共生菌中数量最多,其次是季也蒙毕赤酵母,假丝酵母最少。