背景:建立合适的动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)动物模型是研究其发病机制及探讨治疗措施的重要前提条件,人类动脉粥样硬化(AS)以及动脉硬化尚无完美的动物模型。目前国内建立动脉粥样硬化动物模型有多种选择,猴、鸡、兔等动物易感性较高,容易培养成AS标本。大鼠不仅具有AS的特性,而且饲养方便、成本低廉、获取容易、应用范围广泛,所以人们还是把其作为AS模型的实验动物,并且不断地进行摸索以建立成熟的大鼠动脉硬化模型。12/15-LOX(12/15-脂氧合酶,12/15-lipoxygenase)是一种非铁血红素氧化酶,在人体内不仅可以氧化游离的多不饱和脂肪酸(如花生四烯酸、亚油酸),也可直接氧化复杂底物如磷脂、胆固醇脂以及低密度脂蛋白中的胆固醇脂。它的氧化产物参与多种炎性信号途径,与血管炎症反应的调控密切相关。早期研究认为12/15-LOX可氧化低密度脂蛋白,因此具有促动脉粥样硬化作用。大量动物实验显示,动脉粥样硬化鼠12/15-LOX的活性增高或过表达可加速早期动脉粥样硬化的发生,而抑止12/15-LOX及其产物的活性或敲除12/15-LOX基因则可显著延缓动脉粥样硬化的发生与发展。然而关于兔动脉粥样硬化模型的研究却显示,该酶具有抗动脉粥样硬化作用。这些相悖的结论表明12/15-LOX的表达调控在其参与动脉粥样硬化病理生理作用的机制中有重要意义。12/15-LOX的表达有高度的细胞和组织特异性。DNA甲基化是最常见的复制后及转录前修饰方式之一,在基因表达调控、发育调节、基因组印迹等方面发挥重要作用。有研究发现,启动子区去甲基化是12/15-LOX基因转录激活的必要条件,在12/15-LOX的组织以及器官特异性表达中起重要作用。因此对体内12/15-LOX基因启动子区甲基化状态的研究,将有助于进一步探讨动脉粥样硬化的发病机理,从而为冠心病的预防和治疗提供理论依据。目的:1.高脂饮食喂养+维生素D3注射,成功建立动脉粥样硬化大鼠模型;2.检测动脉粥样硬化大鼠主动脉粥样硬化斑块区的12/15-LOX启动子区的甲基化状态;3.比较动脉粥样硬化大鼠斑块血管组织和非动脉粥样硬化大鼠正常血管组织中12/15-LOX的表达情况。方法:(1)将40只SD大鼠随机分为两组,即对照组和模型组,每组20只。模型组:给予高脂饮食喂养加维生素D3注射;对照组正常饮食。3个月后,处死大鼠,取其主动脉弓至腹主动脉的血管组织,各取0.8cm分别作苏木精-伊红染色和油红O染色油红O染色,进行组织形态学观察。(2)用改进的半定量甲基化特异性PCR法检测血管组织中12/15-LOX基因启动子区甲基化状态,并计算甲基化特异性条带和非甲基化特异性条带的吸光度(A)比值。结果:(1)经苏木精-伊红染色和油红O染色,显微镜下观察可见模型组血管内膜下有多处斑块,大小不等,斑块中可见数目不等的泡沫细胞,有的可见纤维组织增生伴片状或点状钙化,中膜萎缩,呈较典型的成熟AS斑块,对照组,内膜、中膜和外膜分界清楚,管腔面由单层内皮细胞覆盖,细胞完整,中膜主要见梭形平滑肌细胞。(2)根据甲基化特异性条带和非甲基化特异性条带的吸光度(A)比值,把全部血管组织分为低甲基化状态和高甲基化状态。当样本中含有甲基化12/15-LOX基因时,可用M引物扩增出条带,而用引物U则不能扩增出条带,而当样本中含有非甲基化的12/15-LOX基因时,用引物U可扩增出条带,而用引物M则扩增不出条带,模型组斑块区血管组织中12/15-LOX基因启动子低甲基化检出率为85%(17/20),而对照组低甲基化检出率为25%,两者比较,模型组斑块区血管组织中12/15-LOX基因启动子低甲基化检出率显著高于对照组低甲基化检出率(P<0.01)。结论:1.采用高脂饮食喂养加维生素D3注射SD大鼠3个月能够成功建立动脉粥样硬化大鼠模型,大鼠可作为研究动脉粥样硬化的良好动物模型。2.血管斑块处12/15-LOX基因启动子区的甲基化状态与动脉粥样硬化的形成相关,在动脉粥样硬化发病过程中发挥着重要的作用。