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目的缺血-再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,I/R)是指部分组织细胞经历了此阶段,恢复血流和氧供后,组织损伤却更为加重,发生组织结构破坏和功能代谢障碍的不可逆损伤现象,但发病机制尚不清楚。组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylase,HDACs)参与IR发病过程。HDACs可将基因的表达激活,调控染色质结构和基因表达,使组蛋白去乙酰化,去乙酰化则在转录阻遏过程中起作用,不同亚型的HDACs发挥不同的功能作用。曲古霉素A(Trichostatin A,TSA)作为HDACs的抑制剂,是被发现的第1个能抑制HDAC活性以及已知最为有效的化合物。本实验探究HDAC3在细胞缺血再灌注损伤中的作用,TSA通过调控干预H9C2心肌细胞IR损伤中的表达,并进行HDAC3部分机制研究,为临床防治再灌注损伤提供新思路和新的研究途径。方法选取SD大鼠H9C2细胞株进行研究,置于正常培养箱中,选取对数生长期细胞,采用EDTA胰酶液制成细胞悬液后,进行细胞传代和接种。本实验分为以下3组:(1)正常对照组、(2)缺血/再灌注(I/R)组、(3)缺血/再灌注(I/R)+TSA组;参阅相关文献,模拟心肌细胞I/R过程,进行实验。根据以上分组,每组各设6个复孔。将H9C2心肌细胞以1×104/孔的密度接种于96孔板,待细胞贴壁3 h后吸出培养液,正常对照组、I/R组、I/R+TSA组每孔各加入200μL DMEM细胞培养液,各组细胞经处理后继续培养。MTT法检测H9C2细胞增殖活力;检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平;Western Blotting法测定H9C2细胞内HDAC3蛋白表达水平;实时荧光定量PCR检测H9C2细胞HDAC3 mRNA表达情况。结果MTT法检测结果显示:与正常对照组相比较,I/R组、I/R+TSA组抑制率均显著提高,并且I/R显著高于I/R+TSA组;I/R组LDH活性明显高于正常对照组,I/R+TSA组显著低于I/R组;Western blotting检测显示I/R组、I/R+TSA组HDAC3蛋白表达明显高于正常对照组,I/R+TSA组显著低于I/R组;实时荧光定量PCR检测组、I/R+TSA组HDAC3的mRNA表达明显高于正常对照组,I/R+TSA组显著低于I/R组。结论通过检测心肌细胞增殖活性、细胞外LDH含量证实了缺血再灌注对心肌细胞活力的影响。与正常对照组比较,I/R组、I/R+TSA组中HDAC3 mRNA以及蛋白表达明显增加。抑制组蛋白去乙酰化酶后,可以减轻缺血再灌注对心肌细胞的损伤,进一步说明HDAC3表达上调在H9C2细胞缺血再灌注损伤中起重要影响,为临床今后研究缺血再灌注损伤研究和处理提供新的思路。