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目的在课题组前期探索发现合欢花总黄酮提取物具有镇静催眠作用的基础上,通过对中药系统复杂性的认识,并结合前期实验成果,本研究釆用高效液相色谱技术,建立不同产地合欢花总黄酮提取物的指纹图谱,运用灰色关联理论,将中药指纹图谱和药效学实验结果相结合,阐述合欢花总黄酮提取物的指纹图谱与镇静催眠药效的相关性,表征合欢花药材的药效物质基础。方法合欢花总黄酮提取物高效液相指纹图谱研究:按照课题组前期建立的合欢花总黄酮提取工艺,制备合欢花总黄酮提取物供试品,采用高效液相色谱法(HPLC)对12批不同产地合欢花总黄酮提取物进行分析,以槲皮苷为对照品,分别对检测波长,流动相组成及梯度洗脱条件进行筛选,并完成方法学考察,建立12批不同产地合欢花总黄酮提取物指纹图谱后根据化学指纹图谱研究的要求,应用国家药典委员会颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2004A版)”对12批不同产地合欢花总黄酮提取物指纹图谱进行相似度评价。合欢花总黄酮提取物对失眠大鼠的疗效评价:本研究采用腹腔注射PCPA法制作失眠大鼠模型,并通过戊巴比妥钠睡眠协同实验验证是否造模成功及合欢花总黄酮提取物对失眠大鼠的治疗效果。合欢花总黄酮提取物镇静催眠作用机理研究:制作失眠大鼠模型,进行HE染色及免疫组化染色,以大鼠下丘脑及大脑皮质中GABA的阳性表达为指标,研究12批不同产地合欢花总黄酮提取物的镇静催眠机理。合欢花总黄酮提取物镇静催眠作用的谱效关系研究:将12批不同产地合欢花总黄酮提取物指纹图谱共有特征峰的相对峰面积值进行规格化处理,与药效学实验中Glu/GABA的比值降低率相结合,采用灰色关联度分析方法,计算得到指纹图谱各共有特征峰所代表的化学成分对镇静催眠药效贡献的大小。结果本研究建立了12批不同产地合欢花总黄酮提取物的指纹图谱,通过机理研究发现不同产地合欢花总黄酮提取物均具有增强失眠模型大鼠下丘脑及大脑皮质中抑制性神经递质GABA阳性表达的作用。通过对不同产地合欢花总黄酮提取物指纹图谱中19个共有特征峰与镇静催眠药效的相关性研究,得到指纹图谱各共有特征峰所代表的化学成分对镇静催眠药效贡献的大小顺序依次为:X9>X15(槲皮苷)>X12(异槲皮苷)>X18(山奈酚)>X8>X17(槲皮素)>X10>X5>X1>X7>X13>X3>X11>X14>X2>X19(芒柄花黄素)>X6>X4>X16。结论本研究建立了12批不同产地合欢花总黄酮提取物指纹图谱,并通过腹腔注射PCPA法成功制作了大鼠失眠模型,研究了合欢花总黄酮提取物镇静催眠作用的机理,明确了合欢花总黄酮提取物各共有特征峰对镇静催眠药效贡献的大小,进而可知合欢花总黄酮提取物是通过其内部“有效组分群”的协同作用达到镇静催眠效果。本研究仅鉴定出了部分对镇静催眠药效贡献较大的成分的结构,由于中药成分复杂多样,对物质基础有效成分的确认还需要进行更进一步的研究和完善。通过本课题研究,为拓展合欢花的临床应用,明确其药效物质基础提供了理论和实验依据。