目的：应用目前最先进的RNA干扰技术,对已探明在神经细胞轴突生长锥内存在的神经细胞轴突生长相关分子进行功能性研究。针对siRNA转染神经细胞效率低的难题,设计开发出创新的RNA干扰技术,即应用EGFP绿色荧光转基因大鼠的神经细胞,同时双转染EGFP siRNA及目的基因siRNA。 方法：本实验首次开发出应用EGFP绿色荧光转基因大鼠进行siRNA的神经细胞双转染研究方法。首先合成靶基因siRNA,对初代培养的EGFP绿色荧光转基因大鼠胚胎E19日龄的神经细胞进行EGFP siRNA及目的基因siRNA的双转染(首先以脑型脂肪酸结合蛋白质FABP-7为例作为目的基因)。应用荧光间接抗体法对原代培养的神经细胞进行免疫染色。通过对原代培养神经细胞的荧光强度分析,证明siRNA的基因敲除作用,即转录后基因沉默作用。由于EGFP报告基因的siRNA可以使表达绿色荧光的神经细胞的荧光减弱,因此通过寻找荧光减弱或荧光消失的神经细胞,我们就可以确定转染入靶基因的神经细胞。应用专业软件对原代培养的神经细胞进行图像分析,测量神经细胞轴突在特定的轴突生长相关分子被表达沉默后的轴突长度并进行比较。然后应用此方法,对近60种神经细胞轴突生长相关分子进行分析研究。 结果：本研究方法简便可靠,在神经细胞轴突生长相关分子的研究中独辟蹊径。首次在分子水平证明脑型脂肪酸结合蛋白质FABP-17等分子对神经轴突生长具有作用。从近60种神经细胞轴突生长相关分子中筛选出对神经轴突生长有作用的分子18种。 结论：本研究首次开发出应用EGFP绿色荧光转基因大鼠进行siRNA的神经细胞双转染研究方法。为以后全面研究分析神经细胞轴突生长相关分子提供了实验方法和数据。