miRNA-214对胃癌细胞周期和凋亡影响的研究

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目的:研究miRNA-214在胃癌细胞系BGC823、MKN45和SGC7901中的表达及其对细胞周期和凋亡的影响,初步探讨其机制。   方法:(1)荧光定量PCR法检测人正常胃粘膜细胞系GES-1、人胃癌细胞系BGC823、MKN45和SGC7901中miRNA-214的表达;(2)瞬时转染反义核苷酸(miRNA-214inhibitor)下调miRNA-214的表达;(3)流式细胞术分析下调miRNA-214后的细胞生长周期和凋亡率的变化;(4)免疫细胞化学检测miRNA-214的靶基因PTEN蛋白在胃癌细胞中的表达。   结果:(1)miRNA-214在人胃癌细胞系BGC823、MKN45和SGC7901中的表达相对于人正常胃粘膜细胞系GES-1上调,△Ct值分别为5.28±0.12,6.08±0.14,5.89±0.14,7.56±0.18,前三者分别与后者相比差异有统计学意义(P<0.05);(2)转染miRNA-214 inhibitor能使BGC823中miRNA-214下调,转染前后的△Ct值分别为5.32±0.59,7.11±0.33,差异有统计学意义(P<0.05);(3)转染后BGC823、MKN45细胞周期改变,G1期细胞增多,转染前后分别为49.33%±7.99%和60.20%±3.38%,54.85%±0.64%和69.90%±0.28%,差异有统计学意义(P<0.05);S期细胞减少,转染前后分别为32.67%±1.91%和21.87%±3.20%,31.20%±0.42%和18.25%±1.34%,差异有统计学意义(P<0.05),但对细胞凋亡率无影响,转染前后分别为2.71%±1.74%和2.88%±2.39%,2.32%±0.57%和1.89%±0.98%,差异无统计学意义(P>0.1);对SGC7901细胞周期和凋亡率均无影响,转染前后,G1期细胞分别为49.35%±3.18%和47.95%±2.76%,S期细胞分别为34.4%±3.68%和34.65%±3.61%,凋亡率分别为2.46%±0.25%和5.22%±2.79%,差异无统计学意义(P>0.1);(4)免疫细胞化学显示,转染miRNA-214 inhibitor后BGC823、MKN45中PTEN蛋白表达增强,SGC7901中PTEN蛋白表达无变化。   结论:(1)人胃癌细胞系BGC823、MKN45和SGC7901中的miRNA-214呈高表达;(2)miRNA-214能使BGC823、MKN45细胞的G1期细胞减少,S期细胞增多,下调PTEN可能是其作用机制之一;(3)miRNA-214对BGC823、MKN45和SGC7901细胞的凋亡无影响。
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