【摘 要】
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该研究根据结核分枝杆菌HSP65的基因序列,自行设计了一对PCR引物,以人型结核杆菌H37Rv标准毒力株的DNA为模板,经过PCR扩增出其HSP65目的基因,将回收的PCR产物用限制性核酸内
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该研究根据结核分枝杆菌HSP65的基因序列,自行设计了一对PCR引物,以人型结核杆菌H37Rv标准毒力株的DNA为模板,经过PCR扩增出其HSP65目的基因,将回收的PCR产物用限制性核酸内切酶XbaI 和EcoRI双酶酶切后,经T4 DNA连接酶作用,与真核表达载体pcDNA3.1(-)连接,筛选得到的阳性克隆经DNA测序鉴定证实为HSP65基因,且被克隆到载体pcDNA3.1(-)中的CMV启动子的下游,表明已成功构建重组质粒,命名柳cHSP65.研究结果显示:①获得了结核分枝秆菌HSP65目的基因.②经DNA测序证实构建的重组质粒插入有结核分枝秆菌HSP65目的基因.③重组质粒pcHSP65能在真核细胞中表达HSP65蛋自质.④用此重组质粒pcHSP65免疫动物可诱导特异性免疫应答,表明结核杆菌HSP65 DNA疫苗于国内率先构建成功.⑤结核杆菌HSP65 DNA疫苗能诱导全面免疫应答.⑤此DNA疫苗与佐剂IL-2、ASP联合应用时免疫效果增强,结核秆菌感染小鼠存活时间延长.⑦pcHSP65 DNA +IL- 2+ASP佐剂性DNA疫苗诱导实验动物产生特异性IgG的水平最高.③pcHSP65 DNA +IL- 2+ASP佐剂性DNA疫苗能有效增强巨噬细胞活性.③DNA疫苗能诱导Th1型占优势的细胞免疫应答,而佐剂IL- 2+ASP能促进这一应答作用. (10) 于国内外首先报道结核杆茵佐剂DNA疫苗的实验研究,此结核pcHSP65 DNA+IL-2+ASP佐剂DNA疫苗可作为结核预防性疫茵的候选者之一,并为将来用于临床奠定了基础.
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