第一部分claudin-3和claudin-4在正常、增生和恶性子宫内膜组织中的表达目的：检测claudin-3和claudin-4在正常子宫内膜、增生性子宫内膜和子宫内膜样腺癌组织中的表达，探讨claudin-3和claudin-4在正常子宫内膜恶性转化中的作用，分析claudin-3和claudin-4的表达与子宫内膜样腺癌临床病理特征的关系。方法：研究对象为25例正常增殖期子宫内膜、25例正常分泌期子宫内膜、20例单纯性增生内膜、12例复杂性增生内膜、15例不典型增生内膜和30例子宫内膜样腺癌组织。透射电镜观察正常分泌期子宫内膜、不典型增生内膜和内膜癌组织中紧密连接形态学的变化。分别用免疫组化和western blot法检测claudin-3和claudin-4的蛋白表达，用real-time PCR法检测claudin-3和claudin-4的mRNA表达。结果：(1)透射电镜下见子宫内膜样腺癌细胞的紧密连接结构崩解，不典型增生内膜相邻腺上皮细胞的紧密连接结构似正常分泌期子宫内膜，未见明显的结构变化。(2)claudin-3和claudin-4的阳性免疫组化染色主要定位于子宫内膜腺上皮细胞膜。从正常增殖期内膜、正常分泌期内膜、单纯性增生内膜、复杂性增生内膜、到不典型增生内膜和子宫内膜样腺癌组织，阳性染色的比例逐渐增高。(3)western blot分析在正常增殖期内膜、正常分泌期内膜、单纯增生性内膜、复杂增生性内膜、不典型增生内膜和子宫内膜样腺癌组织中，claudin-3的蛋白相对表达率分别为(24.8±11.2)％、(30.1±17.7)％、(44.3±21.4)％、(48.2±20.9)％、(97.5±31.4)％和(147.0±37.7)％；claudin-4的蛋白相对表达率分别为(26.8±14.0)％、(32.4±13.9)％、(48.6±23.5)％、(60.7±27.3)％、(128.3±35.8)％和(210.1±41.2)％。在相同病理类型的内膜组织中claudin-3和claudin-4比较，claudin-4的表达水平略高于claudin-3，但统计学无显著性差异。claudin-3和claudin-4在不典型增生内膜和子宫内膜样腺癌组织中的蛋白表达显著高于正常增殖期内膜、正常分泌期内膜、单纯增生性内膜和复杂增生性内膜。后四者之间claudin-3和claudin-4的表达无显著差异。claudin-3和claudin-4在子宫内膜样腺癌组织中的表达最强，显著高于不典型增生内膜。(4)在癌灶局限于子宫内膜、肌层浸润不超过1／2和肌层浸润超过1／2的子宫内膜样腺癌组织中claudin-3的蛋白表达分别为(97.1±14.5)％、(109.3±35.7)％、(170.4±20.9)％；claudin-4的蛋白表达分别为(132.6±10.3)％、(174.7±41.8)％、(229.1±39.2)％。claudin-3和claudin-4的表达与肌层浸润程度呈正相关。子宫内膜样腺癌组织中claudin-3和claudin-4的表达与内膜癌的手术病理分期和组织分级无明显相关性。(5)在正常增殖期内膜、正常分泌期内膜、单纯增生性内膜、复杂增生性内膜、不典型增生内膜和子宫内膜样腺癌组织中，claudin-3 mRNA的相对定量分别为13.7±2.4、16.2±5.6、25.9±10.3、29.2±12.3、73.4±23.5和104.6±34.1；claudin-4 mRNA的相对定量分别为20.0±5.8、25.3±7.1、43.2±16.5、46.8±20.4、123.7±34.0和220.5±56.2。claudin-3和claudin-4在不典型增生内膜和子宫内膜样腺癌组织中mRNA的表达显著高于正常内膜、单纯增生性内膜和复杂增生性内膜。子宫内膜样腺癌组织中claudin-3和claudin-4mRNA的表达显著高于不典型增生内膜。结论：紧密连接形态学的变化可能滞后于claudins表达的增加。claudin-3和claudin-4在正常子宫内膜、单纯增生性内膜和复杂增生性内膜中的表达水平较低，在不典型增生内膜和子宫内膜样腺癌组织中的表达显著增强。提示claudin-3和claudin-4可能在子宫内膜的恶性转化中起一定作用。第二部分孕激素对子宫内膜癌细胞系claudin-3和claudin-4表达的调节目的：检测子宫内膜癌细胞系Ishikawa中claudin-3和claudin-4的表达状态，及孕激素处理前后claudin-3和claudin-4表达的变化。探讨claudin-3和claudin-4是否与孕激素治疗子宫内膜癌的作用机制有关。方法：用浓度分别为2.5mg／l、5mg／l、10mg／l、15mg／l、20mg／l的甲地孕酮刺激培养子宫内膜癌细胞Ishikawa 24、48、72小时，MTT法检测Ishikawa细胞生长的抑制率，选择最佳半抑制浓度。透射电镜观察孕激素处理前后细胞的形态变化；流式细胞术检测细胞凋亡率；real-time PCR测定孕激素处理前后Ishikawa细胞中claudin-3和claudin-4 mRNA的表达，western blot检测其蛋白水平的表达。细胞免疫荧光染色观察孕激素处理前后claudin蛋白的荧光分布。无药物处理组做对照。结果：甲地孕酮能抑制Ishikawa细胞的生长，浓度为15mg／l作用72小时时Ishikawa细胞生长抑制率达50％。甲地孕酮处理后，透射电镜见细胞凋亡；孕激素处理前细胞凋亡率为(0.06±0.02)％，孕激素处理后细胞凋亡率升至(3.74±0.69)％。Real-time PCR和western blot证实Ishikawa细胞表达claudin-4，未检测到claudin-3的表达。孕激素处理前后Ishikawa细胞claudin-4 mRNA的相对定量分别为62.3±18.5和57.4±15.9；蛋白相对表达率分别为(91.7±21.5)％和(86.4±17.6)％。孕激素处理前后claudin-4的mRNA和蛋白表达水平均无显著变化。细胞荧光染色显示细胞膜分布的claudin-4在孕激素干预后由细胞膜进入细胞浆和细胞核。结论：孕激素可以抑制Ishikawa细胞的生长，其对细胞生长的抑制作用可能与细胞凋亡有关。Ishikawa细胞存在claudin-4的表达，无claudin-3的表达。细胞膜表达的claudin-4整合入细胞内部可能与孕激素抑制Ishikawa细胞生长的信号转导有关。第三部分claudin-3和claudin-4在异位子宫内膜组织中的表达目的：检测claudin-3和claudin-4在正常子宫内膜、子宫内膜异位症患者的在位内膜和异位内膜中的表达，评价claudin-3和claudin-4在子宫内膜异位症发病机制中的作用。方法：选择35例子宫内膜异位症患者的卵巢异位内膜、27例异位症患者的在位子宫内膜和35例正常对照子宫内膜。透射电镜观察正常分泌期子宫内膜、异位症患者的在位分泌期内膜和卵巢异位内膜组织中紧密连接形态学的变化。免疫组化和western blot法检测claudin-3和claudin-4的蛋白质表达，real-time PCR检测claudin-3和claudin-4 mRNA的表达。结果：(1)透射电镜下卵巢异位内膜组织中紧密连接结构消失，胶原组织丰富。异位症患者的在位内膜中紧密连接结构似正常分泌期子宫内膜，未见明显的结构变化。(2)claudin-3和claudin-4的阳性免疫组化染色主要定位于子宫内膜腺上皮细胞膜。在正常子宫内膜、异位症在位内膜和异位内膜中claudin-3的阳性表达率分别为45.7％、44.4％、17.1％；claudin-4的阳性表达率分别为51.5％、48.1％、20％。claudin-3和claudin-4在卵巢异位内膜组织中的表达水平显著低于异位症患者的在位内膜和正常子宫内膜。(3)western blot分析claudin-3在正常子宫内膜，异位症患者的在位内膜和卵巢异位内膜组织中的蛋白相对表达率分别为(85.5±16.9)％、(79.9±16A)％、(20.7±11.2)％；claudin-4的表达分别为(89.4±24.1)％、(83.5±21.8)％、(26.8±13.6)％。claudin-3在正常子宫内膜，异位症患者的在位内膜和卵巢异位内膜组织中mRNA的相对定量分别为12.9±6.4、12.4±6.3、2.0±1.4；claudin-4的mRNA相对定量分别为14.5±6.8、13.8±9.5、2.6±2.5。方差分析卵巢异位内膜组织中claudin-3和claudin-4的mRNA和蛋白表达水平均显著低于异位症患者的在位内膜和正常子宫内膜。异位症患者的在位内膜和正常子宫内膜中claudin-3和claudin-4的表达无显著性差异。结论：异位子宫内膜组织中claudin-3和claudin-4显著降低的表达提示claudin-3和claudin-4可能参与了子宫内膜异位症的发病。