论文部分内容阅读
近年来,纳米材料模拟酶研究引起了人们的极大兴趣。与天然酶相比,这些基于纳米材料的酶类似物具有低成本、便于批量生产、对恶劣环境的适应性、高稳定性、可长期储存、可调控活性、比表面积大、可自组装等优点。更深入的探索纳米人工模拟酶的仿生催化机制,研究表面改性对纳米材料功能和分子识别能力的影响,指导设计开发更多新型纳米仿生材料,拓展其在生命科学、环境科学等领域的应用具有重要的意义。本文以柠檬酸修饰铂纳米粒子和牛血清白蛋白-铂纳米粒子为对象,研究模拟过氧化物酶活性,探索不同表面修饰铂纳米粒子的功能特性,并在此基础上设计构建汞离子、胆碱、乙酰胆碱和乙酰胆碱酯酶分析新方法。论文共分为三章:第一章:柠檬酸修饰铂纳米粒子模拟过氧化物酶作为探针测定汞本章以柠檬酸修饰的铂纳米粒子作为智能探针应用于超灵敏汞离子检测。研究发现,铂纳米粒子表面的柠檬酸可吸附汞离子,并由活性Pt表面原子催化引发Hg2+的原位还原。生成的金属态汞与铂形成汞齐合金,从而抑制铂纳米粒子的过氧化物酶样活性。结合模拟过氧化物酶催化显色体系,此智能纳米探针可实现对Hg2+的超灵敏检测,检测限低至8.5 pM。同时高特异性的Hg-Pt相互作用为Hg2+检测提供了良好的选择性。这些特性使这个探针有望成为检测水中及其它环境样品中Hg2+的有力工具。第二章:基于牛血清白蛋白-纳米铂模拟过氧化物酶测定胆碱和乙酰胆碱本章以牛血清白蛋白为模板,通过生物矿化作用制备了具有过氧化物酶样活性的牛血清白蛋白-纳米铂壳核结构。通过生物矿化所得到的铂纳米粒子在蛋白质外壳的保护作用下具有优异的抗蛋白质污染能力,可在复杂生物样品中保持稳定的过氧化物酶样活性。利用牛血清白蛋白-纳米铂的模拟过氧化物酶特性建立了胆碱和乙酰胆碱的检测方法。将乙酰胆碱酯酶催化乙酰胆碱水解、胆碱氧化酶催化胆碱氧化体系与牛血清白蛋白-纳米铂的模拟过氧化物酶特性催化H2O2/TOPS/4-AAP显色反应相偶联,可实现婴儿配方奶粉中的胆碱以及血浆中的乙酰胆碱的测定。该体系选择性好,灵敏度高,胆碱和乙酰胆碱测定的检测限分别为2.5μM和2.84μM。第三章:BSA-PtNPs-TOOS-MBTH-H2O2显色体系测定过氧化氢和乙酰胆碱脂酶本章利用牛血清白蛋白-纳米铂的模拟过氧化物酶特性催化新型Trinder’s试剂(TOOS-MBTH)被过氧化氢氧化形成蓝紫色产物。通过优化此显色体系的条件,实现了过氧化氢的检测,线性范围为0.2μM0.03 mM,检测限为128 nM。基于上述显色体系,与乙酰胆碱酯酶和胆碱氧化酶双酶催化体系偶合,可实现乙酰胆碱酯酶活性的检测,线性检测范围为0.05-0.4 U/mL,检测限为0.0048 U/mL。该方法专一性好、灵敏度高,为血浆样品中胆碱酯酶的检测提供了一种新的方法。