【摘 要】
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胸腺是T细胞发育成熟的主要部位.T细胞的发育分化是通过基质细胞-胸腺微环境的直接细胞接触和分泌可溶性因子的方式来实现的.该课题研究对象是来源于小鼠胸腺基质细胞系的两
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胸腺是T细胞发育成熟的主要部位.T细胞的发育分化是通过基质细胞-胸腺微环境的直接细胞接触和分泌可溶性因子的方式来实现的.该课题研究对象是来源于小鼠胸腺基质细胞系的两个克隆株,4(5)号细胞和4(12)号细胞,细胞由北京医科大学免疫教研室提供.该文就采用经典RACE技术扩增了NO.10EST作为扩增对象,NO.10EST全长314bp,不与任何已知基因同源,仅它的2/3区域与鼠ESTgi|4315213|高度一致.结果说明:①NO.10EST为正义链.②P3,P4是3RACE的引物,P1,P6是5RACE引物,可以确定第三个引物P7方向与P1,P6相同.③NO.10EST的3端已经得到.5RACE:用基因特异引物P1将总RNA反转录为CDNA,然后用引物AP/P6进行第一轮PCR,将第一轮PCR产物作模板用引物AP.P7进行第二轮半巢式PCR后得到清晰的一DNA条带,将此带回收、纯化、装入T载体,转化大肠杆菌,经兰白斑筛选后,挑取阳性菌测序,得到5RACE序列.
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