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研究依据子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)是在女性生殖系统发生的恶性肿瘤,尽管早期子宫内膜癌患者的预后相对理想,但是超过30%的患者在发现时已处于肿瘤晚期,并且部分患者伴随局部、盆腔甚至远端转移,因此预后不良。肿瘤转移是造成患者死亡的主要原因,因此探索子宫内膜癌的侵袭、转移机制,进一步阐明肿瘤的发展过程显得尤为迫切。近年来,多种生物标记物已被证实与子宫内膜癌的发展有关,但EFEMP2在子宫内膜癌细胞侵袭转移过程中的作用尚未见报道。EFEMP2(EGF containing fibulin-like extracellular matrix protein 2)是一种细胞外基质蛋白,主要参与弹性纤维的合成与排列。EFEMP2与皮肤松弛症、主动脉夹层、骨关节炎、恶性肿瘤等多种疾病有关。为了探索EFEMP2在子宫内膜癌增殖、侵袭、转移中的作用,本研究首次探讨EFEMP2在子宫内膜癌组织及细胞系中的表达情况及相关机制。研究目的1.探究EFEMP2在子宫内膜癌组织、细胞中的表达及其意义。2.探究慢病毒转染后不同侵袭能力子宫内膜癌细胞的功能转变。3.探究EFEMP2对子宫内膜癌细胞侵袭转移的作用机制。研究方法1.免疫组化(IHC)探究EFEMP2在正常子宫内膜组织及子宫内膜癌组织中的表达情况;2.单细胞克隆技术,从KLE、ISK中分离出具有高侵袭能力的克隆细胞亚系KLE-1、ISK-1和低侵袭能力的克隆细胞亚系KLE-28、ISK-23;3.逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)、免疫印迹(Western blot)、免疫细胞化学(ICC)检测EFEMP2在正常子宫内膜、子宫内膜癌细胞系(KLE、ISK、HEC-1A、HEC-1B)以及克隆细胞亚系中的表达情况;4.生长曲线、软琼脂克隆形成实验检测子宫内膜癌细胞系(KLE、ISK、HEC-1A、HEC-1B)以及克隆细胞亚系的增殖能力;5.Transwell侵袭转移实验检测子宫内膜癌细胞系(KLE、ISK、HEC-1A、HEC-1B)以及克隆细胞亚系的侵袭转移能力;6.慢病毒介导EFEMP2在高侵袭克隆细胞亚系过表达及RNA干扰沉默EFEMP2在低侵袭克隆细胞亚系表达,并验证转染效率;7.建立裸鼠移植瘤模型,体内模拟子宫内膜癌发展过程,进一步探究EFEMP2在子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、转移过程中的作用;8.Western blot、RT-qPCR检测EFEMP2与子宫内膜癌细胞上皮间质转化(EMT)之间的关系。研究结果1.EFEMP2在正常子宫内膜组织中阳性表达率高,在子宫内膜癌组织中阳性表达率低(P<0.05);EFEMP2的表达情况与子宫内膜癌组织分化、淋巴结转移、以及不良预后密切相关(P<0.05);2.EFEMP2在正常子宫内膜细胞中高表达,在子宫内膜癌细胞中低表达;在高侵袭克隆细胞亚系中低表达,在低侵袭克隆细胞亚系高表达(P<0.05);3.慢病毒介导EFEMP2过表达后高侵袭克隆细胞增殖能力、侵袭和转移能力减弱;RNA干扰沉默EFEMP2表达后低侵袭克隆细胞增殖能力、侵袭和转移能力增强(P<0.05);4.裸鼠移植瘤模型:高侵袭克隆细胞亚系组肿瘤生长速度快,体积大,低侵袭克隆细胞亚系组肿瘤生长速度慢,体积小;EFEMP2过表达组成瘤率较低,瘤体体积小,肺转移率低,EFEMP2干扰组成瘤率高,瘤体体积大,肺转移率高(P<0.05);5.EFEMP2 过表达组 E-cadherin 表达升高,N-cadherin、Vimentin、Snail、Slug、Twist的表达降低,抑制EMT;EFEMP2干扰组,E-cadherin表达降低,Vimentin、Snail、Slug、Twist 的表达升高,促进 EMT(P<0.05)。研究结论1.EFEMP2是子宫内膜癌的一个抑癌因子,能够抑制子宫内膜癌细胞侵袭、转移;2.EFEMP2抑制子宫内膜癌细胞EMT,进一步抑制子宫内膜癌细胞侵袭、转移。