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为构建显著增加免疫调节范围、增强免疫效应的免疫分子,开拓研制分子免疫增强剂的新途径,本实验室设计合成了一种88bp、含有11个不同CpG基序的新型CpG免疫刺激分子,用离子交联法制备了壳聚糖纳米颗粒(CNP)包裹CpG(CpG—CNP),然后用该CpG-CNP免疫21日龄的昆明鼠,在免疫后35日以大肠杆菌K88,K99口服攻毒实验小鼠。分别在免疫后的第0,7,14,21,28,35,42和49天从小鼠的尾部静脉取血,然后通过ELISA法检测其IgG、IgM和IgA,IL—2、IL—4和IL—6以及免疫细胞的数量变化。结果表明,与对照组相比CpG ODN在体外试验中能够显著的促进猪淋巴细胞的增殖(P<0.05)。CpG-CNP注射小鼠后,其血液中IgG、IgM和IgA不同程度地增多,均显著高于空白组(P<0.05);其血清中IL—2、IL—4和IL—6的含量明显升高,与对照组差异显著(P<0.05);外周血液的白细胞和淋巴细胞数量也较对照组显著增加。攻毒结果表明,CpG-CNP小鼠能够抵御大肠杆菌的侵害健康存活,而对照小鼠表现出明显的感染症状和损伤。说明这种新型CpG-CNP能够显著的提高免疫小鼠的细胞免疫和体液免疫水平,增强小鼠对大肠杆菌感染的抵抗力,具有较强的免疫刺激活性。 将该CpG片段BglⅡ酶切,插入猪IL6基因的VR1020真核表达载体(VPIL6),经StuⅠ酶切鉴定,证实CpG与猪IL—6融合质粒(VPIL—6C)构建成功。将VPIL6-CpG质粒用壳聚糖纳米颗粒包裹后,用该纳米颗粒单独或与巴氏杆菌疫苗、链球菌疫苗、猪瘟弱毒苗联合免疫21日龄的昆明鼠,分别在免疫后的第0,7,14,21,28,35和42日从小鼠的尾部静脉取血,然后通过ELISA法检测其IgG、