目的采用酵母双杂交系统,寻找与LOC401296存在相互作用的蛋白,通过对相互作用蛋白的分析,以进一步了解LOC401296的功能。方法1采用酵母双杂交的方法筛选LOC401296的相互作用蛋白。首先构建p DBLeu-loc融合表达载体,再将p DBLeu-loc转入Ma V203酵母菌株,并进行毒性和自激活检测;然后筛选成人肝c DNA文库,进行阳性克隆三报告基因表型鉴定;最后阳性克隆回转验证,排除假阳性克隆。生物信息学分析筛选到的阳性克隆。2采用细胞免疫荧光方法联合激光共聚焦技术观察LOC401296与相互作用蛋白在HEK293细胞中的共定位。结果1通过酵母双杂交技术筛选出了LOC401296相互作用蛋白。成功构建p DBLeu-loc融合表达载体,并对筛选到的阳性克隆回转验证。将得到的阳性基因进行生物信息学分析共得到8个阳性克隆。2成功构建p EGFP-GRN、p EGFPPLSCR1、p EGFP-N4BP2L2三个融合表达载体。采用细胞免疫荧光方法联合激光共聚焦技术观察LOC401296分别与GRN、PLSCR1、N4BP2L2在HEK293细胞中共定位情况,发现LOC401296与3个相互作用蛋白均存在共定位。结论1通过酵母双杂交技术筛选LOC401296的相互作用蛋白,共筛选出8个阳性克隆,分别为GRN、PLSCR1、N4BP2L2、FN1、NOTCH3、LTBP3、ADAMTS-L4、EGFL7,这些基因各具功能,这表明了LOC401296参与的生物学过程的多样性及其作用机制的复杂性。2通过细胞免疫荧光方法联合激光共聚焦技术对LOC401296和GRN、PLSCR1、N4BP2L2进行了细胞内定位研究,观察到LOC401296与GRN、PLSCR1、N4BP2L2在HEK293细胞内的表达以及良好的共定位情况,为后续研究LOC401296的功能提供了线索。