两株新菌的多相分类和兰花致病真菌拮抗细菌的筛选

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一直以来,新菌都是人们研究的热点,研究新菌不仅能够丰富细菌种质资源,还可以从新菌中发掘新的功能基因,有很大的开发前景和应用潜力。试验对分离自库姆塔格植物的两株新菌进行多相分类研究,明确其分类地位,为进一步开发利用荒漠生态系统微生物资源奠定基础。(1)对菌株N5SSJ16进行多相分类鉴定,结果表明:该菌株为生长需氧的革兰氏阴性杆状菌,大小为(0.2-0.3)×(0.7-1.5)μm,不运动;在TSA培养基上菌落呈圆形,边缘整齐,湿润,黄色不透明;生长Na Cl浓度范围为0-4%(w/v)(最适0%),生长温度范围为12-50℃,生长p H范围为7-9(最适p H为8);主要脂肪酸为iso-C15:0(53.20%)、summed feature 3(C16:1ω7c/C16:1ω6c)(20.94%)、summed feature 9(C16:010-methyl/iso-C17:1ω9c)(9.98%)和iso-C17:03-OH(4.15%),其中组分iso-C17:03-OH(4.15%)与Parapedobacter属近缘种的含量差别较大,说明菌株N5SSJ16不同于该属的已有种;主要呼吸醌类型为MK-7;主要极性脂成分为Phosphatidylethanolamine(PE),unidentified aminophospholipid(UPAL),2种unknown lipids(UL),UPAL和UL的存在使得菌株N5SSJ16区别于Parapedobacter属近缘种;基因组DNA G+C mol%为45.8 mol%;菌株N5SSJ16的16S r RNA基因序列分析显示,菌株N5SSJ16为Parapedobacter属成员,与Parapedobacter composti 4M40T和P.luteus DSM 4M29T相似性最高,相似度分别为96.5%、95.9%。根据表型特征、化学分类特征以及基因型分析结果,确定菌株N5SSJ16为Parapedobacter属的新种,由于该菌源自沙漠地区,故命名为Parapedobacter deserti sp.nov,模式菌株N5SSJ16T。(2)中度嗜盐菌株R4HLG17多相分类鉴定结果表明:该菌株为生长需氧的革兰氏阴性杆状菌,大小为(0.3-0.4)×(0.9-1.5)μm,不运动。在ISP5固体平板培养基上菌落呈圆形,边缘整齐或不整齐,黄色不透明,无色素产生;生长Na Cl浓度范围为0-16%(w/v)(最适5-6%),生长温度范围为16-45℃,生长p H范围为5-9(最适p H7);主要脂肪酸为Summed Feature 8(C18:1ω7c/C18:1ω6c)(34.04%)、Summed Feature 3(C16:1ω7c/C16:1ω6c)(24.57%)、C16:0(16.85%)、C12:03-OH(8.32%)、cyclo-C19:0ω8c(6.36%),其中组分cyclo-C19:0ω8c与盐单胞菌科其他近缘属的含量差别较大;主要呼吸醌类型为Q-9;基于16S r RNA基因序列系统发育分析表明,菌株R4HLG17与盐单胞菌科(Halomonadaceae)各属聚在一起,且形成一个单独的进化分支,与盐单胞菌科内各种的相似性<95.2%。综合表型特征、化学分类特征和基因型特征的分析结果,拟定菌株R4HLG17为盐单胞菌科的一个新属新种。本文采用含菌平板抑菌圈测定法对兰花生产上常见的四种病原真菌恶疫霉(Phytophthora cactorum)、胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和腐皮镰孢菌(Fusarium solani)进行了拮抗细菌的筛选,并对其中效果较好的菌株进行种类鉴定,旨在为兰花病害的生物防治提供生防菌株资源。通过含菌平板抑菌圈测定法初筛获得8株菌株拮抗恶疫霉,8株菌株拮抗胶孢炭疽菌,7株菌株拮抗尖孢镰刀菌以及10株菌株拮抗腐皮镰孢菌。经复筛后有5株菌株可同时拮抗腐皮镰孢菌、尖孢镰刀菌和胶孢炭疽菌三种兰花病原真菌,其中菌株GT312抑菌圈大且清晰透明。根据形态特征观察、生理生化试验和16S r RNA基因序列分析结果,最终鉴定菌株GT312为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。研究为兰花病害的生物防治提供了菌株资源。
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