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Livin是近些年来发现的人IAPs(Inhibitors of Apoptosis Proteins)家族的新成员。根据RNAdraw和Sfold软件计算出的RNA二级结构,设计反义寡核苷酸序列,然后在200nmol·L-1浓度转染SK-MEL1细胞系,结果发现有一些反义序列能够有效的诱导细胞凋亡。其中反义作用最明显的是No.5,其细胞存活率仅为52.6%。利用半定量RT-PCR方法可以检测到livin的mRNA表达量明显降低,同时可增加Caspase活性,降低线粒体膜电位,说明livin可以特异性抑制livin的基因表达,诱导细胞凋亡。用免疫组化和Hoechst33258对转染反义核酸No.5的Hela细胞染色并进行激光共聚焦显微镜观察,可以发现转染后的细胞形态明显改变,多不规则,并且大小不一致。同时细胞的微管排列紊乱,疏密不均,有些聚缩,出现不对称核,甚至出现多核细胞,有些细胞核溶解破碎,染色较浅。这些说明抑制livin的表达能够干扰细胞微管的稳定性,影响纺锤体形成,破坏有丝分裂。 在Raji、Hela、MCF7、SK-MEL1细胞系中利用RT-PCR方法均能检测livin mRNA的表达,而B16小鼠黑色素瘤细胞、HELF人胚肺成纤维细胞未检测出livin。在Hela、HELF和CHO细胞中瞬时转染该基因的哺乳动物表达载体pcDNA3.1(+),然后用阿霉素诱导这些细胞凋亡,转染livin的细胞存活率分别比对照组高出38.9%、10%和18.4%。这一结果显示livin可在表达该基因的细胞系中抗细胞凋亡并对阿霉素的耐药性起一定作用。