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目的:探讨NSCLC耐药细胞的产生与CSCs细胞亚群中SIRT1的表达增高是否有相关性,研究获得性EGFR-TKI耐药机制,为探索克服EGFR-TKI耐药的策略提供一定的实验理论支持。方法:1.利用逐步诱导法成功建立耐药株细胞系,通过Aldeflour检测耐药细胞株与亲本株相比较CSCs的比例是否存在差异。2.通过倒置显微镜观察耐药株与亲本株形态学上的改变。3.采用CCK8法检测PC-9-GR耐药株的建立,并计算其IC50。4.应用Aldeflour?实验检测PC-9与PC-9-GR中ALDH brightright CSCs百分比差异。5.应用Western blot方法检测SIRT1蛋白表达。6.应用QPCR检测SIRT1 mRNA表达,并进行定量分析。7.应用细胞悬浮培养克隆成球能力检测SIRT1小分子抑制剂TV6逆转PC-9-GR获得性耐药表型。8.在裸鼠体内,比较不同治疗方式对瘤体大小的影响。9.运用SPSS 23.0进行数据统计学处理,结果一般采用t检验。GraphPad Prism5.0统计绘图软件进行数据处理、分析并绘制图形。p<0.05时有统计学意义。结果:1.成功建立耐药细胞系PC-9-GR,将诱导后的耐药细胞培养在含1μmol/L吉非替尼的培养基中持续培养。倒置显微镜观察耐药株表现出与亲代细胞系不同的形态,多为不规则,核大,伪足增多。2.通过CCK8法分别检测两株细胞的IC50,结果显示PC-9-GR（耐药株）的IC50显著高于PC-9（亲本株）。3.应用Aldeflour?检测法结果提示:PC-9-GR（耐药株）干细胞比例显著高于PC-9（亲本株）。在存在DEAB的情况下,PC-9-GR中的大部分ALDH bright被消除,表明ALDH bright的特异性（p=0.0014<0.05）。4.SIRT1蛋白的表达通过Western Blot的方法检测,结果显示PC-9-GR中SIRT1蛋白的表达量显著高于PC-9（p=0.0004<0.05）。5.应用QPCR检测SIRT1 mRNA表达,并进行定量分析,结果显示PC-9-GR（耐药株）中SIRT1 mRNA显著高于PC-9（亲本株）（p=0.001<0.05）。6.通过克隆成球实验检测干细胞特性,发现（1）PC-9-GR（耐药株）克隆成球能力显著高于PC-9（亲本株）（p=0.0109<0.05）;（2）PC-9（亲本株）用药后克隆成球能力显著降低（p=0.0049<0.05）;（3）PC-9-GR（耐药株）应用吉非替尼后,成球能力无明显差异（p=0.6583>0.05）;应用SIRT1特异性抑制剂TV6后,成球能力明显降低（p=0.0006<0.05）;而PC-9-GR（耐药株）双药联合后成球能力显著降低（p=0.0003<0.05）。7.不同药物治疗对裸鼠瘤体大小的影响,研究发现:（1）使用吉非替尼组与对照组相比,肿瘤大小无明显差异;（2）应用SIRT1特异性抑制剂TV6后,瘤体变小;（3）双药联合后瘤体明显变小。结论:1.在NSCLC耐药细胞系中CSCs的比例及SIRT1表达比亲代细胞增高。2.协同给予吉非替尼联合TV6能更有效的逆转获得性耐药细胞系的干性状态。