贻贝棘尾虫皮层微管骨架的超微结构及微管蛋白的免疫电镜定位

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本文以腹毛目纤毛虫贻贝棘尾虫(Stylonychia mytilus)为材料,应用扫描电镜术、透射电镜术及免疫电镜术等从细胞皮层超微结构和蛋白质组成、细胞骨架体系等不同水平探讨了贻贝棘尾虫细胞结构的分化特征,所得结果按三部分论述如下:1形态发生中皮层纤毛器的扫描电镜观察贻贝棘尾虫皮层纤毛器由口围带、波动膜、额腹横棘毛、左右缘棘毛、背纤毛等组成。应用扫描电镜术观察到,贻贝棘尾虫无性分裂过程中,处于形态发生区的表膜产生孔洞,于小孔内伸出纤毛芽,组成新纤毛器的原基区;老口围带后1/3部分发生更新,前2/3部分的小膜无明显变化,此后两者共同形成前仔虫的口围带;左、右缘棘毛原基分别在老缘棘毛前端和中部的棘毛瓦解位置产生,此后新的左、右缘棘毛列分别在老缘棘毛的右侧形成。结果表明,贻贝棘尾虫形态发生中,纤毛器基体是在表膜下发生的,前仔虫口围带结构建成与部分老口围带的更新有关,并且处于形态发生区的老纤毛结构对新结构的形成不但具有物质贡献,并可能具有定位或定向作用。本研究从亚显微水平上较完整地显示了贻贝棘尾虫纤毛器骨架形态发生的细节,为深入了解贻贝棘尾虫细胞发育提供新的资料,对进一步揭示微管类胞器的结构和功能是有意义的。2无性生殖周期中皮层微管骨架的透射电镜观察原生动物贻贝棘尾虫微管类细胞骨架除了由口围带、波动膜、额腹横棘毛、左右缘棘毛、背纤毛等构成的纤毛器微管骨架外,还包括纤毛器基部附属微管和其他皮层微管骨架。应用透射电镜术显示,贻贝棘尾虫纤毛区皮层中,除表膜、纤毛基体(含基体微管)、基体附属结构(基体间连接以及基体发出的纤毛后微管、横微管)等结构特征外,还包括毛基体水平的口围带小膜骨架、毛基体下水平的小膜托架及托架后附属纤维,额腹横棘毛骨架及其附属纤维,以及这些纤毛器骨架中毛基体间的连接结构,非纤毛区皮层骨架包括表膜下微管层、皮层左、右侧微管带和尾部微管网等。形态发生过程中,各类纤毛器的基本组成成分毛基体及其联系的纤维结构亦发生规律性的装配和定位过程。上述结果为构建棘尾虫皮层细胞骨架的三维图形,提供了较接近纤毛器整体水平的详细资料,为探索无性分裂过程中各类纤毛原基发生的顺序性及相互关系等有一定的意义。3α-微管蛋白的免疫电镜定位本部分研究综合了国内外应用胶体金标记抗体技术显示细胞骨架及胞内组分的实验方法,结合单细胞原生动物的一些特征,对试剂的配方及操作流程作了部分改良及调整,增加了皂苷孵育、多聚甲醛和戊二醛双重固定等步骤,改进了包埋后染色的步骤。所得结果显示,贻贝棘尾虫口围带小膜基体及基体下的附属纤维、相邻基体间的连接纤维等,棘毛区的基体及纤毛杆等结构均有胶体金颗粒分布,表明这些结构都是一类以微管蛋白为基本成分的微管胞器。胶体金标记抗体技术显示原生动物皮层微管骨架方法的建立是对蛋白银方法、免疫荧光技术的补充和完善。综上所述,本研究应用扫描电镜术显示的纤毛器水平上皮层细胞骨架的形态发生过程、应用透射电镜术从毛基体水平、毛基体下水平显示的贻贝棘尾虫无性生殖周期中皮层细胞骨架的超微结构,与应用免疫电镜技术揭示的贻贝棘尾虫皮层细胞骨架结果基本一致。所有这三部分结果为贻贝棘尾虫形态发生学及分子水平上微管蛋白成分研究提供了基础的资料。
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