论文部分内容阅读
目的:观察蛭龙活血通瘀胶囊拆方组分对大鼠血清丙二醇(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)含量和血管NF-κB、ICAM-1表达的影响,探讨它们对高血压血管重构的影响及作用机制。方法:雄性Wistar大鼠110只,采用单纯随机抽样法抽取正常组12只、假手术组12只。其余大鼠予以肾性高血压大鼠模型建立,其手术方式为缩窄左肾动脉;于2周后筛选模型成功大鼠77只。第7周,从77只大鼠中采用单纯随机抽样法抽取模型组10只、卡托普利组10只、全方组10只、补气组10只、温通经络组10只、活血化瘀组10只。分别以相应药物1次/日给予灌胃,正常组、假手术组以及模型组予以同体积生理盐水。经4周灌胃后,大鼠腹主动脉进行取血,以制备血清。运用化学比色法测量血清MDA、SOD含量。取大鼠胸主动脉,经HE染色后,电镜下观察血管中膜变化,并测量血管中膜厚度(MT)、管腔内径(LD)、血管中膜厚度/管腔内径比(MT/LD)。运用免疫组化染色方法检测血管NF-κB、ICAM-1表达,并用western blot的方法进一步检测血管ICAM-1表达。结果:1.药物对血压的影响:(1)大鼠基础血压值:各组间差异无统计学意义。(2)手术后2周及6周大鼠血压值:正常组和假手术组比较,血压值差异无统计学意义(P>0.05);模型组较正常组和假手术组显著升高(P<0.05);模型组血压值均超过150mm Hg,且较基础血压升高20mm Hg。模型组与各治疗组比较及各治疗组间比较血压值差异均无统计学意义。(3)用药4周后大鼠血压:正常组和假手术组比较,血压值差异无统计学意义(P>0.05),且均较其余各组显著降低(P<0.05);模型组较正常组、假手术组及各治疗组显著升高(P<0.05);卡托普利组较全方组降低不显著(P>0.05),较余治疗组显著降低(P<0.05);且补气组较活血化瘀组降低不显著(P>0.05),较温通经络组显著降低(P<0.05)。2.药物对肾性高血压大鼠氧化应激的影响:(1)药物对肾性高血压大鼠血清MDA的影响:正常组和假手术组比较,血清MDA值差异无统计学意义(P>0.05),且均较其余各组显著降低(P<0.05);模型组较补气组、活血化瘀组升高不显著(P>0.05),较假手术组、正常组及余治疗组显著升高(P<0.05),且补气组较活血化瘀组升高不显著(P>0.05);全方组较卡托普利组升高不显著(P>0.05),较温通经络组及活血化瘀组显著降低(P<0.05),且活血化瘀组较温通经络组升高不显著(P>0.05)。(2)药物对肾性高血压大鼠血清SOD的影响:正常组和假手术组比较,血清SOD值差异无统计学意义(P>0.05),且均较其余各组显著升高(P<0.05);模型组较补气组、温通经络组、活血化瘀组降低不显著(P>0.05),较其余各治疗组显著降低(P<0.05);且温通经络组较活血化瘀组降低不显著(P>0.05),较补气组升高不显著(P>0.05);卡托普利组较全方组及活血化瘀组升高不显著(P>0.05),且全方组较活血化瘀组升高不显著(P>0.05)。3.药物对肾性高血压大鼠胸主动脉中膜的影响:正常组及假手术组血管中膜可见平滑肌细胞排列大致整齐,未见肥大、增生。模型组血管中膜可见中膜明显增厚,平滑肌细胞数增加,排列紊乱;弹力纤维增生,以及断裂;偶可见泡沫细胞。经治疗后,卡托普利组、全方组、补气组平滑肌细胞和弹力纤维增生程度较模型组明显降低,温通经络组、活血化瘀组较模型组增生程度轻度降低。4.药物对肾性高血压大鼠胸主动脉MT、LD、MT/LD的影响:(1)药物对肾性高血压大鼠胸主动脉MT的影响:正常组和假手术组比较,MT值差异无统计学意义(P>0.05),且均较其余各组显著降低(P<0.05);模型组较各治疗组显著升高(P<0.05);卡托普利组较全方组降低不显著(P>0.05),较余各药物组显著降低(P<0.05);补气组较全方组升高不显著(P>0.05),较温通经络组及活血化瘀组降低不显著(P>0.05),且温通经络组较活血化瘀组减低不显著(P>0.05)。(2)药物对肾性高血压大鼠胸主动脉LD的影响:正常组和假手术组比较,LD值差异无统计学意义(P>0.05),且均较其余各组显著升高(P<0.05);模型组较活血化瘀组及温通经络组降低不显著(P>0.05),且活血化瘀组较温通经络组升高不显著(P>0.05);各治疗组显著降低(P<0.05);卡托普利组较余治疗组显著升高(P<0.05);补气组较全方组显著降低(P<0.05),较活血化瘀组及温通经络组升高不显著(P>0.05)。(3)药物对肾性高血压大鼠胸主动脉MT/LD的影响:正常组和假手术组比较,MT/LD值差异无统计学意义(P>0.05),且均较其余各组显著升高(P<0.05);模型组较各治疗组显著降低(P<0.05);卡托普利组较余治疗组显著升高(P<0.05);补气组较全方组显著降低(P<0.05),较活血化瘀组及温通经络组显著升高(P<0.05),且活血化瘀组较温通经络组升高不显著(P>0.05)。5.药物对高血压大鼠胸主动脉NF-κB蛋白表达的影响(免疫组化法):电镜下,棕黄色颗粒为NF-κB蛋白阳性表达,主要分布于血管中膜平滑肌。正常组及假手术组可见少量的棕黄色颗粒;模型组可见散在分布的大量表达棕黄色颗粒;经治疗后,卡托普利组、全方组表达较模型组明显减少,补气组、温通经络组、活血化瘀组表达较模型组有所减少。其中卡托普利组较全方组有所减少;补气组较活血化瘀组表达明显减少,与温通经络组表达相当。6.各组大鼠胸主动脉平滑肌中NF-κB阳性表达的平均光密度值(IOD)比较:正常组和假手术组比较,IOD值差异无统计学意义(P>0.05),且均较其余各组显著降低(P<0.05);模型组较各治疗组显著升高(P<0.05);卡托普利组较余治疗组显著降低(P<0.05);温通经络组较全方组显著升高(P<0.05),较活血化瘀组显著降低(P>0.05),且较补气组降低不显著(P>0.05)。7.药物对高血压大鼠胸主动脉ICAM-1表达的影响(免疫组化法):电镜下,棕黄色颗粒为NF-κB蛋白阳性表达,主要分布于血管中膜平滑肌。正常组及假手术组可见少量的棕黄色颗粒;模型组可见散在分布的大量棕黄色颗粒;经治疗后,卡托普利组、全方组表达较模型组明显减少,补气组、温通经络组、活血化瘀组表达较模型组有所减少。8.各组大鼠胸主动脉平滑肌中ICAM-1阳性表达的平均光密度值(IOD)比较:正常组和假手术组比较,IOD值差异无统计学意义(P>0.05),且均较其余各组显著降低(P<0.05);模型组较各治疗组显著升高(P<0.05);卡托普利组较余治疗组显著降低(P<0.05);温通经络组较全方组显著升高(P<0.05),较活血化瘀组显著降低(P>0.05),且较补气组降低不显著(P>0.05)。9.药物对高血压大鼠胸主动脉ICAM-1表达的影响(western blot法):正常组和假手术组比较,IOD值差异无统计学意义(P>0.05),且均较其余各组显著降低(P<0.05);模型组较各治疗组显著升高(P<0.05);卡托普利组较余治疗组显著降低(P<0.05);温通经络组较全方组显著升高(P<0.05),较活血化瘀组显著降低(P>0.05),且较补气组降低不显著(P>0.05)。结论:1.不完全结扎左肾动脉的手术方式,成功制备了肾性高血压大鼠模型。2.蛭龙活血通瘀胶囊及其拆方组分对肾性高血压大鼠血管重构有明显治疗作用,其作用机制包括氧化应激、炎症反应、血管剪切力。3.蛭龙活血通瘀胶囊不同拆方组分从不同的方面对高血压大鼠血管重构发挥治疗作用:(1)补气组在降低血压方面作用突出;(2)温通经络组:在降低MDA、NF-κB蛋白表达、ICAM-1蛋白表达方面作用显著;(3)活血化瘀组能降低血压、NF-κB蛋白表达、ICAM-1蛋白表达。这说明,蛭龙活血通瘀胶囊其对肾性高血压大鼠血管重构机制,可能与其降低血压、抗氧化应激、抗炎作用有关。各组方配伍后产生了显著的协同增效作用,其配伍后体现了中医药多靶点的治疗优势。