论文部分内容阅读
目的实验检测miR-203a-3p对胰腺癌细胞系增殖、迁移和侵袭能力的影响,为研究胰腺癌的侵袭转移机制和特异性治疗靶点提供实验依据。方法1运用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库筛选正常胰腺组织和胰腺癌组织中有差异的miRNAs,分析热图;挑选有物种保守性的miRNAs,利用Kaplan-Meier分析胰腺癌组织低表达组与高表达组患者miRNAs总体生存率,绘制生存曲线图及临床分期图,筛选出具有统计学意义的miRNAs:miR-192-5p、miR-203a-3p、miR-451a。2利用Tarbase数据库分析这3个miRNAs与癌症相关的GO与KEGG富集通路。3在胰腺癌细胞系Bxpc-3、Aspc-1、Panc-1和人类正常胰腺上皮细胞HPNE,使用实时荧光定量PCR技术(Quantitative real time fluorescene polymerase chain reaction,qRT-PCR)验证筛选的miR-192-5p、miR-203a-3p、miR-451a表达水平,筛选miR-203a-3p作为研究对象。4 CCK-8实验测定miR-203a-3p对胰腺癌细胞系Bxpc-3、Panc-1增殖能力的影响。5 Transwell实验检测miR-203a-3p对胰腺癌细胞系Bxpc-3、Panc-1迁移、侵袭能力的影响。6集落形成实验测定miR-203a-3p对胰腺癌细胞系Bxpc-3、Panc-1集落形成能力的影响。7应用DIANA TOOLS、Mi RDB和Target Scan等网站预测miR-203a-3p的靶基因,分析PPM1A功能,制作基因互作网络图。结果1通过TCGA数据库挑选正常胰腺组织和肿瘤组织差异表达大于2倍的miRNAs共计18个,其中具有物种保守性的miRNAs为miR-192-5p、miR-203a-3p、miR-451a;3个miRNAs分析的Kaplan-Meier曲线、临床癌症分期、富集功能与表达通路具有统计学意义(P<0.05)。2 qRT-PCR结果显示miR-192-5p、miR-203a-3p在胰腺癌Bxpc-3、Aspc-1、Panc-1细胞系表达水平升高,与TCGA数据库分析结果一致;而miR-451a表达水平与TCGA数据库分析结果不一致(P<0.05)。3验证转染有效性结果表明,与NC mimic组相比,转染miR-203a-3p mimic后miR-203a-3p表达水平高显著升高;与NC inhibitor组相比,转染miR-203a-3p inhibitor后miR-203a-3p表达水平显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。4 CCK-8实验表明,与转染NC mimic组相比,转染miR-203a-3p mimic组促进了胰腺癌细胞系Bxpc-3、Panc-1的增殖能力;封闭细胞内源性miR-203a-3p功能后,抑制了胰腺癌细胞系的增殖能力,差异均具有统计学意义(P<0.05)。5 Transwell实验表明,与转染NC mimic组相比,过表达miR-203a-3p促进了胰腺癌细胞系Bxpc-3、Panc-1迁移、侵袭的能力;封闭细胞内源性的miR-203a-3p功能后,抑制了胰腺癌细胞系迁移、侵袭能力,差异均具有统计学意义(P<0.05)。6细胞集落形成实验结果显示,在胰腺癌细胞系转染miR-203a-3p mimic后,与转染对照相比较,miR-203a-3p组细胞集落形成能力增强;封闭细胞内源性miR-203a-3p表达后,与NC inhibitor组相比,miR-203a-3p抑制组细胞集落形成能力降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。7多网站预测显示miR-203a-3p直接靶定PPM1A mRNA的3’UTR区,基因作用网络分析显示PPM1A与多基因存在相互作用。结论1 miR-203a-3p在TCGA数据库胰腺癌组织样本中高表达且具有广泛物种保守性,与患者临床分期相关,miR-203a-3p高表达提示与患者预后生存较差相关。2 miR-203a-3p能够促进胰腺癌细胞系Bxpc-3和Panc-1增殖、迁移、侵袭和集落形成。3生物信息学网站提示PPM1A是miR-203a-3p的靶基因,PPM1A与SMAD3、SMAD2以及SMAD4具有较强的相互作用。图28幅;表4个;参130篇。