论文部分内容阅读
背景与目的:胆管癌是目前世界上常见的消化道恶性肿瘤,由于大多数患者确诊时疾病已属中晚期,总体五年生存率极低,所以改善预后的关键在于早期诊断。近年来,蛋白质组学的迅猛发展,为检测肿瘤标志物提供了一种新技术。本研究采用蛋白质组学的相关技术,建立胆汁蛋白质组双向电泳图谱,筛选胆管癌患者胆汁和正常人胆汁中的差异表达蛋白,以发现可能用于早期诊断胆管癌的肿瘤标志物。方法:(1)收集胆管癌胆汁标本和正常人胆汁标本,分别以丙酮沉淀和TCA/丙酮沉淀法提纯浓缩胆汁蛋白质。(2)经过一维等电聚焦和二维SDS-PAGE电泳,有效分离人胆汁蛋白质。(3)应用PDQuest 8.0 2D图像软件对银离子染色的双向电泳图像进行分析,寻找差异表达的蛋白。(4)取出差异表达的蛋白点,对其进行酶解、质谱鉴定,从而获得肽质量指纹图谱(PMF),利用Mascot和MS-fit软件进行国际互联网数据检索,寻找差异蛋白。(5)对差异蛋白进行功能查询。结果:(1)成功建立胆管癌和正常人胆汁的双向凝胶电泳图谱。(2)丙酮沉淀与双向凝胶电泳技术的结合是研究人胆汁蛋白质组的一种有效的方法。(3)比较不同上样量获得的2-DE图谱,认为200μg上样量能得到分辨率较高的2-DE图谱。(4)质谱分析和数据库检索鉴定出5种有意义的蛋白质,分别是Angiopoien-related protein 1、Fibroblastgrowth factor substrate 2、?–catenin、Kertain,typeⅠCytoskeletal 16和Ras-related protein 37。结论:(1)本研究确立了稳定的胆汁标本采集方法,成功建立和优化了胆汁蛋白质的2-DE/MS技术。(2)蛋白质组学能很好地显示胆管癌胆汁与正常人胆汁间的差异表达蛋白,本研究鉴定的5种差异表达蛋白质可能为研究胆管癌的生物学行为提供新的分子标记物。