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副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus，Vp）和霍利斯格里蒙特氏菌(Grimontia hollisae，Gh)是水产品中的存在的两种食源性致病菌，均可产耐热溶血毒素，使患者引发腹泻、恶心、呕吐等肠胃炎症状。目前对这两种菌的检测标准以常规培养分离方法为主，存在操作复杂、耗时长、工作量大等问题。本研究结合免疫学和分子生物学技术，建立了两种致病菌的快速检测方法，对提高食品安全监控效率，保障食品安全具有重要的意义。 本文以副溶血性弧菌和霍利斯格里蒙特氏菌为研究对象，利用免疫磁性分离、多重PCR、实时荧光定量PCR、LAMP以及数字PCR技术，建立起副溶血性弧菌和霍利斯格里蒙特氏菌的快速检测方法。主要研究内容及结果如下: 1、针对副溶血性弧菌tdh、trh、toxR和tlh基因建立四重PCR反应体系，经过引物浓度优化、退火温度优化，建立四重PCR体系，对副溶血性弧菌DNA模板的检测灵敏度为50pg/μL;纯培养条件下，tdh、trh、tlh和toxR四个基因同时检测的灵敏度为6.7×103CFU/mL。副溶血性弧菌含量为1.36CFU/g的人工模拟样品增菌6h后，可用该体系检出副溶血性弧菌携带的tdh、trh、tlh、toxR基因。该方法可实现同时检测携带toxR、tdh、trh、tlh四种基因的副溶血性弧菌，对开展副溶血弧菌及其毒力基因检测筛查具有实际意义。 2、优化制备特异性捕获副溶血性弧菌的免疫磁珠，同时对Vp的toxR、tdh和tlh三个重要基因建立Taqman三重实时荧光定量PCR，反应体系在菌浓度103～108CFU/mL之间存在良好的线性关系。采用IMS-realtime mPCR对人工污染的海产品中的副溶血性弧菌进行检测，toxR、tlh、tdh的检出限分别为1.6×103、1.6×104、1.6×103CFU/mL 3、针对副溶血性弧菌toxR和tdh基因建立双重ddPCR体系，同时对PMA进行优化得到最佳添加浓度为10μM和最佳光照时间为15min，建立起PMA-ddPCR体系。该体系测得拷贝浓度在菌浓度102～106CFU/mL之间存在良好的线性关系。该方法为对实现副溶血性弧菌活菌绝对定量提供重要基础。 4、优化制备特异性捕获霍利斯格里蒙特氏的免疫磁珠，同时对Gh的fur基因设计特异性引物，成功建立LAMP法检测体系，反应在40min内完成。采用IMS-LAMP法对人工污染的海产品中的霍利斯格里蒙特氏菌的检测限为1.10×104CFU/mL，比用离心法-LAMP检出限降低一个数量级。 5、针对Vp的toxR种特异基因、Gh的recA种特异基因以及两种菌的高同源性tdh毒力基因设计三对引物对，优化反应体系后，对Vp和Gh基因组DNA的检测灵敏度均为0.5pg/μL，对Vp和Gh悬液的检出灵敏度均为103CFU/mL。