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人们在许多软体动物中鉴定出一种多肽,即FMRFamide,并用抗FMRFamide的抗血清在牛脑中枢神经系统中分离出两种内源表达的多肽,一个是八肽——神经肽FF,另一个是十八肽——神经肽VF。神经肽FF在中枢神经系统和外周组织中具有许多功能。神经肽FF发挥其药理学功能,是因为它们能够与两种G-蛋白偶联受体相互作用,这两种受体是NPFF1和NPFF2受体。在几种表达这两种受体的细胞系中,已证实它们都是与Gi/o相偶联的受体,例如CHO、HEK293、SH-SY5Y。经过对NPFF和NPFF2受体的分析实验结果,以及药理学和生理学的实验数据,表明NPFF2受体是NPFF的主要受体。SK-N-SH(人神经母细胞瘤细胞)和SK-N-MC(人神经上皮瘤细胞)是Biedler分别在1970年和1971年建立起来的两种神经组织来源的细胞系。2006年Panula等人发现在SK-N-MC中内源表达NPFF和hNPFF2受体,而且NPFF类似物(1DMe) NPYF能够激活MAPK级联反应。然而,SH-SY5Y是从SK-N-SH中衍生而来的亚细胞系,这是否暗示出在SH-SY5Y中也可能内源表达hNPFF2受体,并且hNPFF2受体能够在该细胞中激活MAPK级联反应。因此,我们用RT-PCR和基因测序的方法鉴定出了在SH-SY5Y细胞中确实有内源的hNPFF2受体的表达。此外,我们还用不同浓度的NPFF作为激动剂处理细胞,发现可以激活MAPK级联反应。NPFF浓度在0.1μM时就已使ERK1/2发生显著的磷酸化,10μM达到最高值。这在功能上证明了hNPFF2受体在SH-SY5Y细胞中的天然表达,还验证了hNPFF2受体被活化后是可以激活ERK1/2信号通路的。有研究证明GPCRs能够激活Akt信号通路,如μ-和δ-阿片受体也能够激活Akt信号通路,并且MAPK和Akt信号通路之间有相互作用。所以我还用NPFF处理细胞,产生剂量依赖的激活Akt信号通路,因为NPFF可以诱导Akt(T308)发生磷酸化。但是,NPFF在100μM的浓度时能使Akt (Thr308)发生显著的磷酸化。这就证明了hNPFF2受体活化后还可以激活Akt信号通路。为了能够更好的研究hNPFF2受体所介导的细胞信号事件,我们还构建了一个稳定表达细胞模型pCDNA3.1(+)-HA-hNPFFR2-HEK293,和一个瞬时表达细胞模型pECFP-C1-HA-hNPFFR2-Hela。总之,我们在SH-SY5Y细胞中鉴定出有hNPFF2受体的天然表达,并且验证了hNPFF2受体被活化后是可以激活MAPK和Akt级联反应。