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铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,P.aeruginosa)能够引起免疫力低下以及囊性纤维化(cystic fibrosis,CF)病人被感染而危及生命。临床抗生素的大量使用导致了多重耐药菌株不断出现。因此,寻找治疗铜绿假单胞菌感染的新途径已迫在眉睫。铜绿假单胞菌具有很强的生物膜(Biofilm)形成能力,是产生耐药性的主要原因之一。群体感应(quorum sensing, QS)和生物膜的形成密切相关。在铜绿假单胞菌中存在lasR/(I)、rhlR/(I),以及PQS(pseudomonas quinolone signal)系统。PAO1为实验室常用菌株,Ps(l)多糖在PAO1生物膜形成过程中起关键作用。 对实验室天然产物库和化合物库进行铜绿假单胞菌生物膜抑制剂的高通量筛选,发现穿心莲内酯衍生物AL-1(14-Alpha-lipoyl andrographolide)可以抑制PAO1生物膜的形成,同时抑制毒性因子:绿脓菌素和胞外多糖的合成,鞭毛介导的泳动性和丛动性,而对其生长几乎没有影响。AL-1与AHLs信号分子结构类似,分子对接(Docking)结果显示AL-1与LasR有相互作用。AHL信号分子缺失株进一步检测AL-1对Las系统的作用,发现AL-1为3-oxo-C12-HSL的竞争性抑制剂。同时以无启动子的luxCDABE为报告基因,检测AL-1对QS相关基因的影响,实验结果显示0.5 mM AL-1作用下,可以抑制Las和Rhl系统基因的转录,而对pqsA、pqsH和pqsR几乎没有影响。荧光定量PCR(Quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)进行验证。AL-1可以在转录水平及翻译水平上影响Psl的合成。qRT-PCR检测AL-1作用下rsmA的转录情况,rsmA的mRNA水平提高了约3倍。Western blot结果显示AL-1能够增加三型分泌系统(type Ⅲ secretion system,TTSS)效应蛋白ExoS和ExoY的分泌。 AL-1和常用抗铜绿假单胞菌抗生素:阿奇霉素(AZM)、环丙沙星(CIP)和链霉素(STR)具有互动作用,当与以上抗生素联合使用时几乎能全部抑制生物膜的形成。 综上所述,本论文深入探讨了AL-1对生物膜抑制作用机理,为临床针对生物膜相关感染的治疗方法提供科学的理论依据。