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目的:探讨 SIRT7(sirtuin7)在结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)感染宿主细胞中所起到的作用及机制。方法:分离结核病人和健康人外周血单核细胞(PBMCs),并分离出CD14+单核细胞提取总RNA逆转录后,用实时荧光定量PCR检测SIRT家族基因表达变化;用培养至对数期的结核分枝杆菌H37Rv感染RAW264.7细胞24h,分别检测上清中NO的浓度变化以及涂布平板法检测CFU的差异;用BCG-GFP感染RAW264.7细胞24h,用流式细胞术检测胞内菌载量的变化;采用慢病毒包装和Lipofectamine 3000脂质体转染的方式获得SIRT7敲低和过表达的细胞系,通过定量逆转录PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹进行验证;细胞凋亡是通过Annexin-V/PI试剂盒进行染色,然后用流式细胞仪检测;并通过FlowJo软件进行分析;所有数据均在GraphPad Prism 6.01中进行分析作图,表示为平均值±标准差(x±s),并进行方差分析(ANOVA)或t检验。P<0.05认为具有统计学意义。结果:(1)通过定量PCR检测,SIRT7在结核患者外周血CD14+单核细胞中表达和健康人相比明显降低(3.93±0.28 vs 1.81±0.12,***P<0.001);同样,当我们用H37Rv感染RAW264.7细胞24后,再次检测,与无感染相比SIRT7的表达明显降低(2.86±0.34 vs 1.43±0.07,***P<0.001)。(2)结核菌感染可以明显增加上清中NO的浓度(2.42±0.36 vs 10.92±2.72,**P<0.01);当预先用 NAM 进行处理后再次感染,上清中NO的浓度有所降低(10.92±2.72 vs 2.88±0.40,**P<0.01),进一步检测了 NO相关基因的表达,发现iNOS和L-arg的表达均降低。(3)与对照组相比预先用10mM浓度的NAM处理的巨噬细胞,胞内菌载量明显增加(25.03±0.79 vs 39.43±0.67,***P<0.001);当我们在SIRT7敲低和过表达细胞系再次进行验证,得到相同的结果即SIRT7的敲低可以明显增加胞内菌载量。(4)SIRT7的敲低可以抑制早期凋亡(16.13±1.48 vs 7.58±0.71,***P<0.001);过表达后早期凋亡增加(3.80±0.30 vs 9.49±1.28,***P<0.001);而对晚期凋亡却没有影响(11.93±0.74 vs 9.49±1.28,P>0.05)。(5)通过涂布平板法数CFU我们发现,预先用iNOS抑制剂L-NAME和L-NMMA处理的组,CFU计数明显增加(11.33±1.45 vs 26.67±3.93,*P<0.05),和用SIRT7抑制剂NAM处理的组具有相同的结果(11.33± 1.45 vs 23.33±4.05,*P<0.05),而这种菌落数的增加是可以通过外源性NO供体SNAP进行回补的(23.33±4.05 vs 13.33±2.84,*P<0.05)。(6)同样的在SIRT7敲低和过表达的实验中,我们得出了相同的结果,即与空载相比SIRT7的敲低CFU明显增加(22.33±3.66 vs 42.33±2.18,**P<0.01),而与空载组相比SIRT7的过表达CFU明显降低(28.02±2.20 vs18.33.±2.19,*P<0.05)。(7)最后我们检测了巨噬细胞分泌细胞因子的表达,我们发现与空载组相比,SIRT7的敲低可以明显抑制NF-κB依赖的细胞因子的表达。结论:我们的结果表明,SIRT7可以通过调控NO和凋亡发挥其抗结核分枝杆菌感染的功能,SIRT7可以作为结核病治疗的潜在药理靶点。