本研究通过对大肠杆菌代谢途径的分析，结合基因操作手段，对影响N-乙酰氨基葡萄糖代谢的相关基因进行了修饰，利用Red重组技术，敲除了编码分解和转运N-乙酰氨基葡萄糖相关酶的nagDCABE基因簇，克隆并超表达了能耐受中间产物氨基葡萄糖的mglmS基因，克隆了编码6-磷酸氨基葡萄糖乙酰转移酶的ScGNAl基因，并将这两个基因整合至大肠杆菌染色体上，以便于稳定表达。通过上面步骤，构建了一株高产N-乙酰氨基葡萄糖的工程菌。通过优化发酵工艺，70小时左右发酵后，N-乙酰氨基葡萄糖的平均产量达到76.83g/L，葡萄糖平均转化率达到43.97％。最后利用膜过滤、脱色、浓缩结晶等工艺，得到了纯度高达99％的纯品。从而形成了从菌种选育、发酵到分离纯化完整的“发酵法生产N-乙酰氨基葡萄糖”工艺路线。相比传统生产工艺，新工艺避免了强酸、强碱等化学试剂的使用，污染少、能耗低，对环境友好，已具备工业化潜力和可观的社会经济效益。