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目的:本研究主要通过脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的小胶质细胞炎症模型,评价熊胆粉（bear bile powder,BBP）及其胆汁酸成分猪去氧胆酸（hyodeoxycholic acid,HDCA）和鹅去氧胆酸（chenodeoxycholic acid,CDCA）的抗炎作用,并探讨其可能的发生机制,以期为其临床用于炎症相关神经系统疾病治疗提供理论依据。方法:1.BV2小胶质细胞炎症模型建立、给药及炎症相关指标检测:用200 ng/m L的LPS诱导BV2小胶质细胞,建立神经炎症模型。细胞分为对照组、LPS 200 ng/m L组、BBP 25、50、100μg/m L组/HDCA 25、50、100μmol/L组/CDCA 25、50、100μmol/L组、地塞米松（Dexamethasone,DEX）10μmol/L组。预给药BV2细胞BBP（25、50、100μg/m L）/HDCA（25、50、100μmol/L）/CDCA（25、50、100μmol/L）2h,加入LPS继续培养22 h;CCK-8法检测细胞活力,Greiss法检测NO释放含量;实时定量PCR法（RT-PCR）法检测肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素6（interleukin-6,IL-6）、白细胞介素1β（interleukin-1β,IL-1β）m RNA的表达;蛋白免疫印迹法（western blot,WB）法检测环氧合酶2（cyclooxygenase-2,COX2）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,i NOS）、G蛋白偶联受体（G-protein coupled receptor 5,TGR5）蛋白表达;分别预给药BV2细胞BBP（25、50、100μg/m L）/HDCA（25、50、100μmol/L）/CDCA（25、50、100μmol/L）2 h,加入LPS继续培养1 h,WB法检测核转录因子κB（nuclear factor-κB,NF-κB）、NF-κB抑制蛋白α（inhibitor of NF-κB,IκBα）、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B（serine/threonine kinase,AKT）信号通路蛋白表达;分别预给药BV2细胞BBP（25、50、100μg/m L）/HDCA（25、50、100μmol/L）2 h,加入LPS继续培养6h,给药CDCA（25、50、100μmol/L）2 h,加入LPS继续培养1 h,细胞免疫荧光法（immunocytochemistry,ICC）观察NF-κB核移位情况;分别预给药BV2细胞BBP（25、50、100μg/m L）/HDCA（25、50、100μmol/L）2 h,加入LPS继续培养1 h,提取核蛋白检测NF-κB表达;将细胞分为对照组、LPS（200 ng/m L）组、LPS+BBP 100μg/m L组、LPS+BBP 100μg/m L+Triamterene 10μmol/L、Triamterene 10μmol/L组或对照组、LPS（200 ng/m L）组、LPS+HDCA 100μmol/L组、LPS+HDCA 100μmol/L+Triamterene 20μmol/L、Triamterene 20μmol/L组,预给药BV2细胞BBP100μg/m L/HDCA100μmol/L及BBP 100μg/m L+Triamterene 10μmol/L/HDCA 100μmol/L+Triamterene 20μmol/L 2 h,除对照组及Triamterene组外,其余各组给予LPS,继续培养22 h,WB法检测炎症相关蛋白表达水平。2.建立LPS诱导的动物炎症模型:用0.8 mg/kg的LPS腹腔注射小鼠建立神经炎症模型。雄性C57BL/6小鼠随机分为:对照组、LPS组、BBP 100、200、400 mg/kg组/HDCA 25、50、100 mg/kg组、DEX 10 mg/kg组共6组,每组12只。除对照组及模型组灌胃给予0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）,其余各组相应灌胃给药,每天1次,共7天。于最后一次给药0.5 h后,除对照组给予生理盐水外,其余各组腹腔注射LPS,24 h后成模。给药同时记录体重变化,q PCR检测TNF-α、IL-6、IL-1β基因m RNA表达;WB法检测海马及大脑皮层中COX2、i NOS、钙离子结合衔接分子（Ionized calcium binding adapter molecule 1,Iba1）、TGR5蛋白及NF-κB/AKT信号通路相关蛋白表达。结果:1.BBP对LPS诱导的BV2细胞炎症作用及机制研究:BBP可以显著抑制NO的释放;显著下调TNF-α、IL-6和IL-1β基因m RNA的表达;减少NF-κB核移位;显著下调i NOS、COX2蛋白表达,显著上调TGR5及下调NF-κB、IκBα及AKT通路蛋白磷酸化表达;给予TGR5抑制剂后,BBP抑制炎症相关蛋白表达的作用显著降低。2.BBP对LPS诱导的炎症模型小鼠作用及机制研究:BBP给药能显著降低小鼠海马中TNF-α、IL-6和IL-1βm RNA的表达;下调i NOS、COX2及Iba1蛋白表达,并上调TGR5蛋白表达,减少NF-κB、IκBα及AKT通路蛋白磷酸化表达。3.HDCA对LPS诱导的BV2细胞炎症作用及机制研究:HDCA可以显著抑制NO的产生;显著下调TNF-α、IL-6和IL-1β基因m RNA的表达;可以减少NF-κB核移位;并显著下调i NOS、COX2蛋白表达,显著上调TGR5的同时显著下调NF-κB、IκBα及AKT通路蛋白磷酸化表达;给予TGR5抑制剂后,HDCA抑制炎症相关蛋白表达的作用显著降低。4.HDCA对LPS诱导的炎症模型小鼠作用及机制研究:HDCA给药后能显著降低小鼠海马中TNF-α、IL-6和IL-1βm RNA含量;下调i NOS、COX2及Iba1蛋白表达,能显著上调TGR5蛋白表达同时显著下调NF-κB、IκBα及AKT通路蛋白磷酸化表达。5.CDCA对LPS诱导的BV2细胞炎症作用及机制研究:CDCA能显著抑制NO的释放;可以显著下调TNF-α、IL-6和IL-1β基因m RNA的表达,上调TGR5基因m RNA的表达;减少NF-κB核移位;显著下调i NOS、COX2蛋白表达,显著增加TGR5同时显著减少NF-κB、IκBα及AKT通路蛋白磷酸化表达。结论:1.BBP具有显著的抗神经炎症作用,可以抑制LPS诱导的小胶质细胞激活,其发生机制与上调TGR5,抑制AKT/IκBα/NF-κB信号通路相关。2.HDCA具有显著的抗神经炎症作用,可以抑制LPS诱导的小胶质细胞激活,其作用机制与上调TGR5,抑制AKT/IκBα/NF-κB信号通路相关。3.CDCA能有效抑制LPS诱导的BV2细胞的激活,其作用机制可能与上调TGR5,抑制AKT/IκBα/NF-κB信号通路相关。