甲状腺激素（Thyroid Hormone，TH）对生长、分化、发育和保持代谢平衡具有十分重要的作用。业已证明，TH这种作用是通过结合甲状腺激素受体(thyroid hormone receptor,THR)来调控microRNA从而影响下游靶基因的转录而实现的。为了阐明甲状腺激素对microRNA的调控机制，本研究通过探究在microRNA加工成熟方面起重要作用的Drosha酶与甲状腺激素受体两者之间的关系，以初步验证它们之间的相互作用的机理。本实验一方面采用了免疫共沉淀（Co-IP）的方法经Western Blot和质谱分析，验证了甲状腺激素受体与Drosha蛋白之间的关系；另一方面采用了对甲状腺激素受体α/β基因的过表达和基因沉默，研究甲状腺激素受体对microRNA的影响。主要结果如下：　　1.甲状腺激素受体与Drosha蛋白两者之间关系的分析　　本实验以HEK293细胞为材料，通过免疫共沉淀的方法研究两者之间的相互关系，采用Western Blot的方法检测。实验设计为：通过抗鼠THR多抗和抗兔Drosha单克隆抗体免疫共沉淀KEK293细胞中总蛋白（以IgG为对照抗体），获得THR和Drosha蛋白免疫复合物，经SDS-PAGE凝胶电泳分离THR和Drosha免疫共沉淀复合物，然后以抗兔Drosha单抗和抗鼠THR多抗进行Western Blot检测。研究结果表明：用THR抗体免疫共沉淀复合物中检测出有Drosha蛋白的存在，反之Drosha免疫共沉淀复合物中检测有THR的存在。初步证明甲状腺激素受体与Drosha蛋白之间存在相互关系。　　为了进一步分析两者之间的相互关系，将上述THR和Drosha抗体免疫共沉淀复合物经质谱鉴定分析，结果显示：与THR作用的蛋白可信度较高的有263个，其中有Drosha蛋白的存在；与Drosha蛋白有相互关系的可信度较高的蛋白有249个，其中包含甲状腺激素受体。对质谱数据分析发现，有49个蛋白与两者都存在相互关系。经GO功能聚类分析这些蛋白主要是细胞膜和细胞核中成分，不仅参与甲状腺激素受体及Drosha蛋白的生物学作用，也参与细胞迁移、细胞生物合成、细胞凋亡、蛋白代谢等分子功能。经KEGG代谢通路分析显示，49个蛋白主要参与糖酵解、甘油脂代谢、谷胱甘肽代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、钙离子信号通道、蛋白质外派、氨基酸的生物合成等多种代谢通路。该结果表明甲状腺激素受体与Drosha蛋白之间确实存在相互关系，并且是与其他蛋白结合在一起形成一个蛋白复合体。　　2.甲状腺激素受体过表达或沉默对microRNA表达的分析　　本实验分别构建甲状腺激素受体α/β真核表达载体，在HEK293细胞内进行基因过表达和基因沉默。首先将构建的甲状腺激素受体α/β真核表达载体转入HEK293细胞中过表达，再采用荧光定量PCR方法检测microRNA的表达情况；其次采用RNA干扰方法对甲状腺激素受体α/β基因在HEK293细胞中进行沉默，再采用荧光定量PCR方法检测microRNA的表达情况。　　结果显示：　　（1）将甲状腺激素受体α/β基因过表达后转染组和未转染组之间的pre-miRNA-21相对表达量有显著差异，其余 miRNA之间并无显著性差异。　　（2）通过合成THRα/β基因siRNA干扰序列，THRα/β沉默后检测发现未转染组和转染组之间pre-miRNA-182的相对表达量有显著性差异，其余pre-miRNA表达量无显著差异。由此说明，甲状腺激素受体与Drosha之间存在相互作用，并且甲状腺激素受体可直接影响部分Pre-miRNA的表达。至于甲状腺激素受体是如何与 Drosha相互作用这有待进一步深入研究。　　结论：甲状腺激素受体与Drosha蛋白之间存在相互关系，并且是与其他49个蛋白结合在一起形成一个蛋白复合体，甲状腺激素受体对部分microRNA的调控直接发挥作用。