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【研究背景与目的】高同型半胱氨酸血症(Hyperhomocysteinemia, Hhcy)是阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)一个重要、独立的高危因素。继NO和CO之后的第三种气体神经调质-硫化氢(Hydrogen sulfide, H2S)，对神经突触可塑性和增进记忆能力方面具有调节作用。我们以往的研究结果表明H2S可拮抗同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)对学习记忆和认知功能的损伤作用，但作用机理尚未阐明清楚。目前有研究表明BDNF-TrkB (brain-derived neurotrophicfactor-Tropomyosin receptor kinase B)通路和SIRT1(Silent informationregulator1)对学习与记忆具有重要的调节作用。我们的前期研究发现H2S可上调神经细胞BDNF和SIRT1的表达。因此，我们推测H2S抗Hcy损害学习记忆和认知功能的作用可能与其调节BDNF-TrkB通路和SIRT1有关。本实验采用对SD大鼠单侧侧脑室注射Hcy染毒从而建立AD的动物模型，予K252a (TrkB受体特异性拮抗剂)或Sirtinol (SIRT1特异性拮抗剂)预处理阻断相应通路，探讨阻断BDNF-TrkB通路和SIRT1能否逆转H2S对Hcy损害SD大鼠学习记忆和认知功能的拮抗作用，以明确BDNF-TrkB通路和SIRT1对H2S抗Hcy损害学习记忆和认知功能的介导作用。【方法】Y-maze、新物体识别和Morris水迷宫检测大鼠学习记忆和认知能力；Westernblotting方法检测海马组织中SIRT1和BDNF蛋白的表达。【结果】1. BDNF-TrkB通路介导H2S抗Hcy损害认知功能的作用K252a (1μg/d)侧脑室给药阻断BDNF-TrkB通路，30min后予以H2S供体NaHS (5.6mg/kg/d)腹腔注射，连续2d后，再连续7d联合单侧侧脑室微量注射4μL的Hcy (0.6μmol/d)。采用Y-maze、新物体识别和Morris水迷宫检测大鼠学习记忆和认知能力。Y-maze实验结果显示K252a (1μg)阻断BDNF-TrkB通路逆转了H2S (5.6mg/kg)对Hcy (0.6μmol)降低大鼠交替率的改善作用；新物体识别实验显示K252a (1μg)阻断BDNF-TrkB通路逆转了H2S (NaHS,5.6mg/kg)改善Hcy(0.6μmol)组大鼠新物体识别指数的作用。Morris水迷宫获得性训练期第四天结果显示Hcy (0.6μmol)组大鼠寻找平台的潜伏期较对照组显著延长，且其游泳路线更曲折、复杂，NaHS (5.6mg/kg)预处理可改善Hcy延长大鼠潜伏期的作用，而事先予以K252a (1μg)阻断BDNF-TrkB通路可逆转H2S对Hcy延长大鼠潜伏期的改善作用。Morris水迷宫空间搜索实验显示Hcy (0.6μmol)组大鼠穿过原平台的次数较对照组减少，且在目标象限时间比和中环游泳时间比均减少，NaHS (5.6mg/kg)预处理可改善Hcy减少大鼠穿过原平台次数的作用，而事先予以K252a (1μg)阻断BDNF-TrkB通路可逆转H2S对Hcy损害大鼠学习记忆的改善作用。上述结果提示：阻断BDNF-TrkB通路可逆转H2S拮抗Hcy对SD大鼠学习记忆和认知功能的损害作用。2. SIRT1介导H2S抗Hcy损害认知功能的作用SD大鼠腹腔注射NaHS (1.68,5.6mg/kg/d)2d后，单侧侧脑室微量注射4μL Hcy (0.6μmol/d)，连续7d。采用Western blotting方法检测海马组织中SIRT1蛋白的表达。结果显示，Hcy对SIRT1蛋白表达的下调作用可被H2S逆转。表明H2S对SIRT1表达具有上调作用。Sirtinol (10nmol/d)侧脑室给药阻断SIRT1，30min后予以H2S供体NaHS(5.6mg/kg/d)腹腔注射，连续2d后，再连续7d联合单侧侧脑室微量注射4μL的Hcy (0.6μmol)。采用Y-maze、新物体识别和Morris水迷宫检测大鼠学习记忆和认知能力。Y-maze实验结果显示Sirtinol (10nmol)抑制SIRT1表达逆转了H2S (NaHS,5.6mg/kg)对Hcy (0.6μmol)降低大鼠交替率的改善作用；新物体识别实验显示Sirtinol (10nmol)抑制SIRT1表达逆转了H2S (NaHS,5.6mg/kg)改善Hcy (0.6μmol)组大鼠新物体识别指数的作用。Morris水迷宫定位航行实验第四天结果提示Sirtinol抑制SIRT1表达逆转了H2S (NaHS,5.6mg/kg)对Hcy (0.6μmol)延长大鼠潜伏期的改善作用；空间搜索实验结果提示Sirtinol抑制SIRT1表达逆转了H2S (NaHS,5.6mg/kg)对Hcy(0.6μmol)减少大鼠穿过原平台次数和在目标象限时间比和中环游泳时间比的改善作用。上述结果提示：阻断SIRT1可逆转H2S拮抗Hcy对SD大鼠学习记忆和认知功能的损害作用。3. SIRT1抑制剂Sirtinol能够逆转H2S对Hcy下调BDNF表达的改善作用提前用Sirtinol (10nmol/d)阻断SIRT1，WB法检测BDNF表达情况。结果显示，阻断SIRT1表达后可逆转H2S对Hcy下调BDNF表达的改善作用。表明，SIRT1通过BDNF-TrkB通路介导H2S拮抗Hcy对SD大鼠学习记忆和认知功能的损害作用。【结论】H2S通过SIRT1上调BDNF-TrkB通路拮抗Hcy对SD大鼠学习记忆和认知功能的损害作用。